Делеционное картирование короткого плеча хромосомы 3 человека в четырех типах рака с помощью панели высокополиморфных микросателлитных маркеров

• Автор: Базов, Игорь Валентинович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с.

Содержание
Введение

1. Обзор литературы

1.1. Г снысупрессоры опухолевого роста

1.2. Методы поиска геновсупрессоров опухолевого роста

1.2.1. Цитогенетический анализ

1.2.2. Анализ аллельных потерь

1.2.3. Нестабильность микросателлитов в опухолях

1.2.4. Тонкая локализация и идентификация генов в клонированных фрагментах ДНК

1.2.5. Методы прямого клонирования делегированных и амплнфнцированных фраг ментов ДНК опухоли

1.3. Делеционное картирование короткого плеча хромосомы

человека в опухолях почки, легкого, молочной железы, шейки матки и других органов
1.3.1. Делеции на коротком плече хромосомы 3 в опухолях почки
1.3.2. Делеции на коротком плече хромосомы 3 в опухолях легкого
1.3.3. Делеции на коротком плече хромосомы 3 в опухолях
молочной железы
1.3.4. Делеции на коротком плече хромосомы 3 в опухолях женских репродуктивных органов
1.3.5. Делеции на коротком плече хромосомы 3 в опухолях
других органов
1.4. Геныкандидаты на коротком плече хромосомы 3 человека
1.4.1. Область 3рр
1.4.2. Область Зр
2. Материалы и методы
2.1 .Реактивы и ферменты
2.2. Буферные растворы
2.3. Сбор материала
2.4. Выделение геномной ДНК из ткани человека
2.5. Панель мнкросатсллнтных маркеров
2.6. Полимеразная цепная реакция
2.7. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации
2.8. Анализ потерн гетсозиготности
3. Результаты и обсуждение
3.1. Аллельные изменения на коротком плече хромосомы
в эпителиальных опухолях четырех локализаций
3.1.1. Типы аллельных изменений на хромосоме Зр в ДНК
из опухолей учет потерь Н и I.аллелей
3.1.2. Аллельные изменения на хромосоме Зр в образцах
рака почки
3.1.3. Аллельные изменения на хромосоме Зр в образцах
рака легкого
3.1.4. Аллельные изменения на хромосоме Зр в образцах
рака молочной железы
3.1.5. Аллельные изменения на хромосоме Зр в образцах
рака шейки матки
3.2. Сравнение аллельных изменений на коротком плече
хромосомы 3 в четырех видах эпителиального рака
3.2.1. Сравнение частоты и протяженности делений
в четырех типах эпителиального рака
3.2.2. Корреляция протяженности делеций с гистопатологнческнм типом опухоли почки и легкого
3.2.3. Районы частых аллельных лелеций в четырех
типах эпителиального рака
3.2.4. Микросатсллитная нестабильность в четырех
типах эпителиального рака
3.2.5. Дупликация и амплификация аллеля в четырех типах эпителиального рака
Выводы
Список литературы


Полученные результаты позволили впервые корректно сравнить частоты аллельных потерь, нестабильности микросателлитов и делеций разных типов на хромосоме Зр в эпителиальных опухолях разных локализаций. Генысупрессоры опухолевого роста. Рак это заболевание генетического аппарата определенного типа клеток, при котором мутации в ДНК приводят к селекции клопа клеток, способного к неконтролируемому росту Киселев, . Рост и развитие раковой опухоли, как правило, сопровождается появлением множественных дслецнй. Предположение о том. Боверн vi еще в г. В настоящее время представления о генетической природе развития онкологических заболеваний основаны на предположении о существовании генов, либо стимулирующих клеточную пролиферацию протоонкогены, либо подавляющих пролиферацию генысупрессоры опухолевого роста, . Эти две труппы генов осуществляют противоположные функции в нормальной жизнедеятельности клеток. Баланс нарушается при превращении протоонкогена в онкоген или при инактивации гснасупрсссора, что и в том, и в другом случае может привести к неконтролируемому росту клеток. При этом подразумевается, что восстановление функции гснасупрсссора может привести к существенному замедлению пролиферации и даже обратить развитие опухоли . Трансформированные клетки обладают несколькими особенностями, отличающими их от клеток нормального фенотипа. К таким критериям можно отнести утрату трансформированными клетками обычного днплондиого набора различные хромосомные нарушения, исчезновение предела делений иммортализация, нарушение контактного торможения, уменьшение зависимости от факторов роста. Сбои в системе клеточного цикла, приводящие к неограниченному делению клегок, к утрате контроля над делением являются, повидимому, главными механизмами роста раковой опухоли. Гены, участвующие в процессах клеточного цикла на разных его стадиях и выполняющие разные функции, играют, таким образом, важную роль в канцерогенезе и являются либо онкогенами, либо генамисунрсссорами опухолевого роста Киселев. Первым и наиболее полно генетически охарактеризованным гепомсулрсссором стал ген ретинобластомы опухоли, развивающейся из эмбриональной сетчатки и наследуемой в большинстве случаев но аугосомнодоминатггному типу с ной пенегрантностью. Почти у половины потомков родителей, пораженных билатеральной ретинобластомой, развивается это новообразование. Кроме семейных случаев возникновения ретинобластомы описаны и спорадические случаи. В результате эпидемиологических исследований , была предложена двухударная теория развития этого заболевания у пациентов с наследственной предрасположенностью одна мутация унаследована ими от родителей, а заболевание проявляется после тот, как последующая соматическая мутация приводит к делении или инактивации оставшегося аллеля. В спорадических случаях требуется два соматических события в клетке, последовательно инактивирующих два аллеля, что также приводит к образованию опухоли. Цитогенетический анализ хромосом пациентов с ретинобластомой выявил микроскопически видимые делеции в районе i . . Для анализа хромосомных событий, вовлеченных в инициацию опухоли, в сравнении опухолевой н нормальной тканей были использованы ДНКмаркеры v . Совокупность этих подходов позволила локализовать ген ретинобластомы 1 еще до того, как его удалось клонировать i . Таким образом, на примере гена ретинобластомы была разработана стратегия поиска гсковсупрсссоров опухолевого роста. По занимаемому месту в системе функционирования эукариотической клетки генысупрессоры опухолевого роста можно разделить на две большие группы. Биологическая функция Геновсупрессоров может быть связана непосредственно с контролем клеточного цикла, со сверкой его механизмов. Гены этой группы получили название тсновхранитслей клеточного цикла i Vi, . Белковые продукты этих генов способны сдерживать прогрессию опухолевого роста, ингибируя процессы, связанные с делением клетки, Гены второй группы это гены общего контроля , функция которых состоит в поддержании стабильности генома.