Апоптозная фрагментация, синтез и метилирование ДНК в проростках пшеницы : Влияние фитогормонов и антиоксидантов

• Автор: Шорнинг, Борис Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 88 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ стр.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Общая характеристика процесса запрограммированной гибели.

2. Сравнение запрограммированной гибели клеток у животных и у растений.

3. Примеры запрограммированной гибели клеток у растений.

3.1. Ксилогенез.

3.2. Запро1раммированная гибель клеток при репродуктивных процессах.

3.3. Гибель клеток при прорастании семян.

3.4. Гибель клеток при гиперчувствнтсльном ответе на вторжение патогенов I

3.5. Старение.

3.6. Запрограммированная гибель клеток при неблагоприятных
условиях среды.
4.Роль активных форм кислорода и антиоксидантов в процессе запрограммированной гибели клеток.
4.1. Активные формы кислорода медиаторы процесса клеточной смерти
4.2. Продукция активных форм кислорода у растений.
4.3. Активные формы кислорода и антиоксиданты.
5. Роль митохондрий и хлоропластов в запуске программы запрограммированной клеточной гибели.
5.1. Митохондрии.
5.2. Хлоропласты.
6. Протеазы и нуклеазы основные исполнители программы клеточной гибели.
6.1. Протеазы.
6.2. Нуклеазы и фрагментация ДНК при апоптозс
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Выращивание этиолированных проростков и синхронизация их
роста.
2. Выделение ДНК
2.1.Выделение суммарной ДНК
2.2. Использование модифицированного метода Шмидта и Таннгаузера
для выделения и очистки ДНК от примесей РНК.
3. Разделение ДНК в градиенте плотности СяС1.
4. Электрофорез ДНК.
5. Определение содержания ДНК и белка в колеоптилях проростков пшеницы.
6. Определение уровня метилирования ДНК.
7. Проведение полимеразной цепной реакции.
8. Определение скорости генерации супсроксида.
9. Выделение, фракционирование и определение характеристик субклеточных частиц.
. Определение спектров поглощения пигментов.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. АПОПТОЗ В КЛЕТКАХ ПРОРОСТКА ПШЕНИЦЫ
1.1. Апоптозная фрагментация ДНК конечная стадия процесса
отмирания клеток проростка пшеницы.
1.2. Синтез тяжелой митохондриальной ДНК НмтДНК
маркерное явление процессов старения и алоптоза в проростках
пшешшы.
1.3. НмтДНК синтезируется в особых пакуолярных везикулах.
2. ЦИКЛИЧЕСКАЯ ГЕНЕРАЦИЯ СУПЕРОКСИДА СОПРОВОЖДАЕТ РАЗВИТИЕ ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ
3. АНТИОКСИДАНТ ВНТ ИОНОЛ ВЛИЯЕТ НА РОСТ И
РАЗВИТИЕ ПРОРОСТКА ПШЕНИЦЫ
3.1. Антиоксидант ВНТ ионол понижает уровень супсроксида и изменяет развитие проростков пшеницы.
3.2. ВНТ препятствует возрастному уменьшению количества ДНК и белка в колеоптиле.
3.3. Рештнкативный синтез ядерной ДНК и периодичность агнтеза
ДНК в колеоптиле под действием ВНТ не изменяются.
3.4. Антиоксидант ВНТ предотвращает апоптозную фрагментацию
ДНК. 5Б
3.5. Антиоксидант ВНТ предотвращает синтез тяжелой митохондриальной ДНК.
3.6. ВНТ влияет на уровень метилирования ДНК.
3.7. ВНТ индуцирует синтез пигментов в корнях.
4. ВЛИЯНИЕ ФИТОГОРМОНОВ НА АПОПТОЗНУЮ
ФРАГМЕНТАЦИЮ ДНК
5. ВЛИЯНИЕ ИНГИБИТОРА МЕТИЛИРОВАНИЯ ДНК 5
АЗАЦИТИДИН НА АПОПТОЗНУЮ ФРАГМЕНТАЦИЮ ДНК
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


СОДЕРЖАНИЕ стр. Общая характеристика процесса запрограммированной гибели. Сравнение запрограммированной гибели клеток у животных и у растений. Примеры запрограммированной гибели клеток у растений. Ксилогенез. Запро1раммированная гибель клеток при репродуктивных процессах. Гибель клеток при прорастании семян. Старение. Роль активных форм кислорода и антиоксидантов в процессе запрограммированной гибели клеток. Продукция активных форм кислорода у растений. Активные формы кислорода и антиоксиданты. Роль митохондрий и хлоропластов в запуске программы запрограммированной клеточной гибели. Митохондрии. Хлоропласты. Протеазы и нуклеазы основные исполнители программы клеточной гибели. Протеазы. ДНК от примесей РНК. Разделение ДНК в градиенте плотности СяС1. Электрофорез ДНК. Определение содержания ДНК и белка в колеоптилях проростков пшеницы. Определение уровня метилирования ДНК. Проведение полимеразной цепной реакции. Определение скорости генерации супсроксида. Выделение, фракционирование и определение характеристик субклеточных частиц. Определение спектров поглощения пигментов. НмтДНК синтезируется в особых пакуолярных везикулах. Антиоксидант ВНТ ионол понижает уровень супсроксида и изменяет развитие проростков пшеницы. ВНТ препятствует возрастному уменьшению количества ДНК и белка в колеоптиле. ДНК в колеоптиле под действием ВНТ не изменяются. ДНК. Антиоксидант ВНТ предотвращает синтез тяжелой митохондриальной ДНК. ВНТ влияет на уровень метилирования ДНК. ВНТ индуцирует синтез пигментов в корнях. Принятые сокращения 6БАП 6бснзиламинопурин БСА бычий сывороточный альбумин Аадснин АВА абсцизовая кислота ВНТ бутил гидрокснтолуол, или 2,6дитретбугил4метил фенол, или ионол Ьрпара оснований ДНК Сцитозин дитиоэритритол этилсндиаминтстрауксусная кислота Аэтиленг ликол ь6й