Выявление и характеристика ДНК-связывающих белков, взаимодействующих in vitro и in vivo с хроматин-зависимым регуляторным участком ДНК мышиного mist

• Автор: Прохорчук, Анна Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с.

Ьелкн, связывающие микросагеллитиые последовательности ДНК. Заключение . Плазмиды н конструкции. Футпрннтинг i vi с использованием ДНКазы. Определение САТ активности разными . Выделение ядерных белковых экстрактов . Блоггибридизация но Весзерну со специфичными . Результы и обсуждения. Определение гнперчу ветвнтельных к обработке ДНКазой участков в первом и втором нитронах гена мыши. Структурно н функционально консервапшиын район в первом нитроне гена . Изучение i viv ДНКбслковых взаимодействий с послсдоватсльнстью. ДНКазой ДГУ2 в клетках линий б и 0 в гене . Нуклеосомная орг ашиапня первою ннтрона гена в клетках линий КСМЛ0 н VПечень. Изучение нового белкового фактора, связывающеюся с метилированной последовательностью ДНК, расположенной с Зкониа ДГУ2. Изучение взаимодействия iv vi метилсненнфнчного белка с фрагментом гена мыши 5, 4. Связывание i vi мстилспсцифичного белка с олигонуклеотидами, содержащими СрСостровок. Определение молекулироной массы метнлснеинфичного белка. Определение консенсусной последовательности связывания метилсисиифнчным белком с помощью последовательных нсгощеннй вырожденной последовательности. Клоироианне нового специфичного к метилированию ДНК белка. Список литературы. МеСР белит, связывающие последовательности ДИК. ДИК. П.Н. Обзор литературы. Введение. За последнее десятилетие открыто более сотни онко и антионкогенов задействованных в неопластической трансформации клеток. Каждая опухоль имеет свой собственный генетический портрет, он меняется в течение роста опухоли, затрудняя понимание молеку лярноенетических причт ей образования. Выявление генетических и молекулярных процессов, лежащих в основе возникновения опухоли и опухолевой прогрессии , контролируемых большим числом енов и их белковыми продуктами, вносит большой вклад в понимание процессов онкогенеза. Одним из процессов, которые сопровождают неопластическую трансформацию клеток и широко изучаются в последние годы, является изменение структуры хроматина, приводящее к изменению уровня транскрипции генов. Так гиперацетилированне или дсацетилнрованне гистонов задействованы в неопластических процессах, к примеру индукция гиперацетилнровзння антионкогена р может предотвратить карцнногенеэ рака толстой кишки 4. Не смогря на факт, что в подавление транскрипции юна регинобластомы гена супрессора вовлечены различные механизмы такие как мутации гена рстинобластомы. Д1, показано, что в ряде опухолей отсутствуют дефекты в пути рстинобластомы, предполагая участие структуры хроматина в регуляции экспрессии гена 5. Одним из таких эпигенетических эффектов является метилирование последовательностей ДИК в промоторе гена ретинобласгомы. Е2Р семейства. Кроме изменения участков связывания транскрипционными факторами метилирование ДНК помогает стабилизировать хроматин в неактивной форме н, тем самым, подавляет транскрипцию генов. Последние исследования соединили вместе процессы деацетилирования гистонов и гипсрмстнлнровання ДНК, ведущие к образованию транскрипционно неактивного хроматина, через метил узнающие белки и белковые комплексы гистондсацстилаз. Кроме эпигенетических изменений хроматина в процессе неопластической трансформации клеток происходят и струхтурныеперестройки генома, изменение последовательности ДНК. Одной из таких горячих точек нестабильности является мнкросателлитная ДНК . В данной работе изучались регуляторные элементы, расположенные в первом нитроне гена ил. Ген ранее был охарактеризован, как коррелирующий с метастатическим фенотипом многих опухолевых клеток . Олин из элементов был охарактеризован как короткая последовательность микросателлнтной ДНК и участок с наибольшей плотностью метилирования СфГпар в гене. Целью работы являлось изучение регуляторных элементов, действующих на уровне хроматина, сложного энхаясера первого нитрона гена ти. Метилирование генома эукариот. В геноме прокариот нуклеотидные основания ДНК подвергаются модификации метилирования. ДИК 1 . ДНК. ДНК. За 0 млн. СХ пар. СО в раз выше, чем в среднем по геному. СО островками.