Исследование цитотоксической активности и механизмов действия производных бетулина и глицирризиновой кислоты в опухолевых клетках в культуре

• Автор: Шинтяпина, Александра Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 112 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клеточные культуры как модель экспериментальной онкологии .

1.2. Разработка адресованных противоопухолевых препаратов

1.2.1. Создание новых противоопухолевых препаратов, влияющих

на передачу митогенных сигналов

1.2.2. Молекулярные мишени для антиангиогенной терапии

1.2.3. Теломераза потенциальная мишень противоопухолевой терапии.

1.2.4. Противоопухолевые препаратыиндукторы апоптоза . .
1.3. Тритерпеновые соединения.
1.3.1. Глицирризиновая кислота.
Противоопухолевая активность.
1.3.2. Бетулин, бетулиновая кислота.
Противоопухолевая активность.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. Реактивы, используемые в работе.
2.1.2. Исследуемые соединения
2.1.3. Клеточные линии.
2.1.4. Олигодезоксирибонуклеотиды.
2.1.5. Буферные растворы.
2.2. Методы.
2.2.1. Исследование цитотоксической активности соединений в . опухолевых клетках в культуре МТГтест
2.2.2. Анализ апоптоза методом проточной цитометрии
2.2.3. Выделение суммарной клеточной РНК.
2.2.4. Определение концентрации РНК в образце
2.2.5. Реакция обратной транскрипции.
2.2.6. Полимеразная цепная реакция.
2.2.7. Анализ продуктов ПЦР
2.2.8. Флуоресцентная гибридизация i i с последующим анализом
на проточном цитометре I
2.2.9. Статистическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование цитотоксической активности производных высших тритерпенов i vi.
3.1.1. Исследование цитотоксической активное производных бегулина i vi.
3.1.2. Исследование цитотоксической активности производных глицирризиновой кислоты i vi
3.2. Исследование способности тритерпенов вызывать апоптоз в опухолевых клетках i vi
3.3. Изучение молекулярных механизмов противоопухо левого действия производных тритерненовых соединений
3.3.1. Исследование влияния производных тритерпенов на экспрессию гена Вс12 в опухолевых клетках
3.3.2. Исследование влияния производных тритерпенов на экспрессию гена i 1 в опухолевых клетках.
3.3.3. Исследование влияния производных тритерпенов на экспрессию гена в опухолевых клетках
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Данные последних исследований свидетельствуют о том, что БК, ГК и другие природные тритерпены ингибируют пролиферацию опухолевых клеток, индуцируют их апоптоз К. . i . . i . . i М. Однако, несмотря на значительное количество данных о противоопухолевой активности растительных тритерпеиов, на настоящий момент не до конца понятны механизмы их действия в клетке. Показано, что основной противоопухолевый механизм действия тригерпенов связан с индукцией апоптоза в опухолевых клетках, запуск которого под действием ГК, БК в раковых клетках осуществляется независимо от рецепторов смерти и белка р. С другой стороны, из литературных данных известно, что при действии бетулиновой кислоты на опухолевые клетки происходит активация каспазы 9, но не каспазы 8, что может говорить о Вс12зависимом пути индукции апоптоза . V. Изложенное выше определило цель настоящей работы изучение противоопухолевой активности производных тритерпенов i vi и исследование возможных молекулярных механизмов их противоопухолевого действия в опухолевых клетках человека i vi. Исследовать цитотоксичсскую активность высших терпеноидов амиранового и лупанового рядов глицирризиновой кислоты, глициррстовой кислоты, бегулина, бетулиновой кислоты и их производных в культурах опухолевых клеток, выявить наиболее активные. Изучить с помощью метода проточной цитомстрии способность наиболее активных производных тритерпеновых соединений индуцировать апопгоз в опухолевых клетках человека линии МТ4, 4, СЕМ, 2, . Исследовать влияние наиболее активных производных тритерпенов на экспрессию гена апоптоза Вс12 и клеточного цикла i 1 в опухолевых клетках человека в культуре. Исследовать с помощью метода флуоресцентной гибридизации i i с последующим анализом на проточном цитомстре возможное влияние производных наиболее активных тритерпенов на экспрессию гена каталитической единицы тсломеразы в опухолевых клетках i vi. Апробация работы и публикации. Результаты исследования были представлены на ой международной школеконференции для молодых ученых Биология наука XXI века Пущино, . СПИД, рак и общественное здоровье СанктПетербург, , , , на 8ом международном симпозиуме i i i Гейдельберг, Германия, , на ом международном симпозиуме европейского общества медицинской химии и американского химического общества Ii i v i i ii i СанктПетербург, . По результатам работы опубликовано 8 печатных работ, из них 2 статьи и 6 тезисов докладов. Личный вклад автора. Все эксперименты были выполнены и проанализированы автором, часть измерений на проточном цитометре была проведена сотрудниками Института клинической иммунологии СО РАМН Борисовым В. И. и Пронкиной Н. Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые проведено тестирование на противоопухолевую активность соединений тритерпенового ряда на 5 опухолевых клеточных линиях человека. ИДзо. Выявлены наиболее активные. С помощью метода про точной цитометрии получены новые данные, характеризующие способность природных тритериенов лупанового ряда и их производных индуцировать апоптоз в опухолевых клетках i vi. Исследованы молекулярные механизмы действия тритериенов лупанового ряда в клетке. Впервые показано, что механизм дейегвия производных бетулиновой кислоты связан со снижением экспрессии гена апоптоза Вс12, клеточного цикла i, каталитической субъединицы теломеразы . Оригинальный фактический материал, полученный в процессе экспериментальных исследований, представляет собой ценную информацию для дальнейшего изучения противоопухолевого действия тритерпенов с целью направленного создания производных с повышенной специфичностью воздействия на молекулярные мишени опухолевых клеток. Приведенные исследования также являются стимулом для дальнейшего доклинического исследования производных бетулиновой кислоты в системах i viv их противоопухолевой активности и создания на их основе перспективных препаратов со специфической противоопухолевой активностью.