Экспрессия в гетерологичных системах генов химерных иммуноглобулинов и гена барстара

• Автор: Родин, Дмитрий Викторович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список обозначений и сокращений з

Введение

Обзор литературы з

1 Иммуноглобулин Е как возможный агент противоопухолевого

иммунитета

1 Сведения о функциях иммуноглобулина Е

2 Инициация синтеза иммуноглобулина Е

3 Регуляторные функции иммуноглобулина Е

4 Иммуноглобулин Е и аллергическая реакция как факторы развития и ингибирования

роста опухолей

5 Количественные оценки концентрации иммуноглобулинов в терапии
2. Генотерапия
1. Общее описание типов генотерапия
2 Основные направления клинического применения генотерапия
3 Химерные антитела как эффекторный белок терапии
4 Факторы, обеспечивающие эффективность генотерапии
1 Доставка генетического материала
2 4 2 Экспрессия генов
3. Эксперессия генов барстара и химерного иммуноглобулина Резюме обзора литературы
Материалы и методы
Результаты И Обсуждение
. Создание генетической конструкции и анализ экспрессии гена барстара в фибробластах человека и в эмбрионе мыши
2. Баллистическая трансфекция
3. Экспрессия генов химерного в различных тканях и органах мышей,
иммунный ответ на ксеногенные детерминанты
4. Вывод формулы подсчета количества экспрессированного химерного белка
5. Количественный анализ экспрессии химерного 1Е и иммунного ответа
на ксеногенные детерминанты
ВЫВОДЫ
Список литературы


Стр. Экспрессия генов химерного В последние десяилетия одним из наиболее востребованных подходов в биологических и биомедицинских исследованиях стало создание генетических конструкций для экспрессии целевых белков непосредственно в жиом организме. В соответствии с конечными практическими приложениями этой методологии сформировались два основных направления генотерапия и ДНКиммунизация. Одним из наиболее востребованных направлений применения генотерапии является подход с применением интрател, который состоит во введении в организм генетических конструкций, кодирующих антитела с запрограммированными антигенсвязывающими иили эффекторными функциями. В связи с этим необходимо, с одной стороны, искать оптимальные способы введения в клетки чужеродных генов, а с другой изучить закономерности экспрессии введенных генов в зависимости от типа ткани. Весьма важно также оценить иммунный ответ организма на ксеногенные детерминанты синтезирующихся рекомбинантных белков. В настоящей работе исследовали генетические конструкции для экспрессии простых однодоменных и сложных мультидоменных белковых молекул. Были сконструированы плазмиды, несущие ген барстара под контролем эукариотических регуляторных элементов для его экспрессии в эукариотах. На нервом этапе исследования работа являлась поисковой. Было необходимо определить принципиальную возможность исследования экспрессии гена барстара в эукариотических системах. Работа выступала предтечей работ по созданию химерных полноразмерных иммуноглобулинов. При работе с химерными мышьчеловек иммуноглобулинами класса Е основной задачей было апробирование подхода к экспрессии генов иммуноглобулинов i vi и i viv. Конкретно анализ экспрессии под гетерологичным промотором и оценка уровня биосинтеза целевого белка. Также была дана количественная оценка иммунного ответа организма на чужеродные антигенные детерминанты синтезированных антител. Иммуноглобулины являются эффекторными молекулами гуморального ответа являясь сложными белками, гликопротеинами, они, также как и рецепторы Вклеток, специфически связываются с чужеродными антигенами и обеспечивают распознавание чужеродного антигена и инициацию иммунного ответа 1. Иммунная система организма иногда отвечает на появление чужеродных антигенов чрезмерно сильно. Такая неадекватная реакция называется гиперчувствительностью, которая обусловлена несколькими механизмами. Гиперчувствительность типа I опосредована аллергенспецифическим рис. Рис. Доменная структура Табл. Таблица 1. Роль 1Е в опосредовании синдромных реакций. Аллергический ринит и астма характеризуются очень быстро появляющейся гиперчувствительностью, сопровождаемой воспалительной реакцией, для появления которой требуется рекрутирование циркулирующих эффекторных клеток в ткани.