Характеристика ферментов амилазного комплекса термофильной бактерии Thermotoga Neapolitana

• Автор: Березина, Оксана Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 99 с.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификация амилаз

1.2. Структура крахмала и других аЭглюканов

1.3. Субстратная специфичность амилаз

1.4. Классификация гликозилгидролаз на основе гомологии

аминокислотных последовательностей

1.5. Способы действия амилаз на полисахаридный субстрат одноцепочечный, многоцепочечный, множественная
атака
1.6. Строение активных центров амилаз. Концепция ХиромиТома
1.7. Общие черты каталитического механизма, характерные для
гликозилгидролаз в целом
1.8. Особенности механизма действия амилаз
1.9. Пространственная структура амилаз
1 Кальций и другие металлы в молекулах амилаз. Основные физикохимические свойства амилаз
1 Применение микробных амилаз
1 Термостабильные амилазы
1 Гипертермофильпые эубактерии рода ТЪегтоюа
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАИЯ
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды
2.2. Химические реагенты и ферменты
2.3. Выделение хромосомной ДНК ТИ. пеаро1Иапа
2.4. Конструирование геномной библиотеки I.i и создание
библиотеки рекомбинантных клонов
2.5. Выделение и анализ плазмидной ДНК
2.6. Определение нуклеотидной последовательности
2.7. Определение амилолитической активности на чашках
2.8. Приготовление клеточных экстрактов и первичная очистка
2.9. Определение субстратной специфичности и анализ продуктов
гидролиза
2 Определение концентрации белка
2 Электрофоретические методы исследования белков
2 Определение активности термостабильных амилолитических
ферментов в клеточных экстрактах
2 Очистка из . i рекомбинантных глюкозидазы и
цикломал ьтодекстриназы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Создание банка генов . i. Отбор клонов,
продуцирующих термос габилыгыс амилазы
3.2. Определение и сравнительный анализ нуклеотидной
последовательности участка ДНК . i из клонов, проявляющих активность на полимерных субстратах
3.3. Характеристика рекомбинантной малыодекстрин
гликозилтрансферазы . i
3.4. Сравнение свойств мальтодекстрингликозилтрансфераз из .
i и . ii
3.5. Сравнительный анализ аминокислотной последовательности
мальтодекстрингликозилтрансферазы из . i
3.6. Характеристика фрагмента хромосомной ДНК из клонов,
гидролизующих метилумбеллифершшосОмальтозид
3.7. Получение штамманродуцента и свойства i А
3.8. Получение штам мапроду цента и свойства Л
3.9. Некоторые отличия в расположении генов . i и i.
ii
3 Использование мальтодекстрингликозилтрансферазы и циклом ал ьтодексгриназы для одностадийного гидролиза крахмала
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Стр. Строение активных центров амилаз. Кальций и другие металлы в молекулах амилаз. Выделение хромосомной ДНК ТИ. Конструирование геномной библиотеки I. Очистка из . Создание банка генов . ДНК . . Сравнение свойств мальтодекстрингликозилтрансфераз из . . Некоторые отличия в расположении генов . Гидролиз крахмала до глюкозы под действием ферментов амилаз, является одной из отраслей биотехнологии. В связи с широкой распространенностью растений, богатых крахмалом, амилазы занимают важное место в биохимических исследованиях, направленных на решение задач биотехнологии, связанных с получением сахаров из возобновляемых источников сырья. Особый интерес проявляется в отношении термостабильных ферментов. Проведение биотехнологических процессов при высоких температурах с использованием термостабильных ферментов позволяет ускорить гидролиз за счет увеличения скоростей реакций, понижения вязкости растворов как исходных веществ, так и продуктов гидролиза, а также избежать опасности микробного заражения сред. Экстремально термофильные эубактерии рода , живущие в геотермальных источниках при температурах С, являются облигатными гетеротрофами и используют для роста различные углеводородные субстраты, в частности, крахмал. В настоящее время известно несколько амилолитических ферментов I ii, обладающих исключительно высокой активностью и устойчивостью к воздействию различных денатурирующих агентов при температурах ЮОС, что делает их перспективными для применения в ряде промышленных производств. Например, при ферментативном гидролизе крахмала, при получении глюкозофруктозных сиропов, необходимо действие амилаз на крахмал при температуре С и выше. Амилазы могут выдерживать такую температуру без потери активности и интенсивности гидролиза. Высокая термостабильность амилаз позволяет использовать их в качестве удобной модели для исследований механизмов, обуславливающих термостабильность белковых молекул. , изучение их физикохимических свойств и оптимальных условий действия представляют значительный интерес. Целью настоящей работы стало изучение ферментов амилазного комплекса гипертермофильной эубактерии i. Классификация амилаз. Амилазы но Международной номенклатуре классификации ферментов относятся к классу гидролаз, подклассу гликозидаз КФ 3. Они гидролизуют а1,4 и или а1,6глюкозидные связи в крахмале, гликогене и родственных поли и олигосахаридах 1. К амилолитическим ферментам в настоящее фремя относят аамилазу КФ 3. КФ 3. КФ 3. КФ 3. КФ 3. КФ 3. КФ 3. КФ 3. По мнению некоторых авторов 4 ферменты класса трансфераз цикломальтодекстринглюканотрансферазу КФ 2. КФ 2. Эти ферменты гидролизуют а1,4глюкозидные связи в молекуле аПглюкана и переносят образовавшуюся часть углеводородной цепи на акцепторный субстрат, которым может быть глюкоза или аОглюкан. Структура крахмала и других аРглюканов. Естественным субстратом амилаз является крахмал, состоящий из двух полисахаридов глюканового типа линейного амилозы и разветвленного амилопектина. Различные виды крахмала содержат амилозы и амилопектина 5. Линейные молекулы амилозы содержа Г Да.