Изучение цитотоксических белков и белковых комплексов, ответственных за цитолиз трансформированных клеток

• Автор: Шаталов, Юрий Викторович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

Оглавление
Оглавление.

Список сокращений

Введение.

Обзор литературы.

Врожденный и приобретенный иммунитеты

Пеитидогликанраспознающие белки.

Семейство РвЯР содержит 4 пептидогликанраспознающих белка человека

Заключение

Участие белков теплового шока в защитной реакции организма .

Классификация белков теплового шока Нвр.

Факторы индукции Нэр
Регуляция экспрессии белков семейств Нвр
Локализация и свойства семейств Ывр.
Структурнофункциональный анализ белков семейства НБр.
Заключение
Материалы и методы
Белки, ферменты и реактивы
Культивирование трансформированных клеточных линий, лимфоцитов и
спленоци гов
Выделение мембран клеток
Аффинная хроматография
Коиммунопреципитация
Электрофорез и Вестерн блот.
Массспектрометричсский анализ
Получение поликлональных антител к и 7
Гельфильтрация.
Клонирование 7.
Клонирование человека и его фрагментов.
Определение цитолитической активности
Определение фрагментации ДНК.
Определение АТФазной активности
Трансфекция клеток 1.
Результаты и обсуждения.
Поиск партнера 7
Стехиометрия комплекса 7
Комплекс 7 обладает цитолитической активностью
Картирование участков необходимых для образования комплекса
Роль АТФ в образовании цитотоксического комплекса 7.
Комплекс 7 i viv
Выводы а
Благодарности.
Список литературы


РНК, не метилированную ДНК и др. РАМР патогенассоциированный молекулярный паттерн. Однако провести однозначное деление на врожденный и приобретенный иммунитет невозможно, поскольку некоторые клетки участвуют как во врожденном так и в приобретенном иммунитетах, например, различные антигенпрезентирующие клетки макрофаги, дендритные клетки, субпопуляции плазматических Влимфоцитов. Только совместное координированное действие этих видов иммунитета может обеспечить надежную защиту организма. Существуют факторы, которые участвуют, как во врожденном, так и в приобретенном иммунитете, при этом выполняемые ими функции могут сильно различаться. Одним из таких факторов является система пептидогликанраспознающих белков РСЛР. Белки семейства РвЯР узнают пептидогликан и липополисахарид, присутствующие на поверхности патогенов, и активируют иммунный ответ. , I или рецепторов, однако прямого взаимодействия белков с рецепторами пока не показано. Некоторые белки семейства обладают амидазной активностью, т. Также остается открытым вопрос о цитотоксичносги белков семейства . Так одни авторы показали, что 7 мыши, полученный в системе трансфицированных клеток, обладает цитотоксичностью, однако другие авторы утверждают, что рекомбинантный не обладает цитолитической активностью. Изучение белков, вовлеченных в работу врожденного и приобретенного иммунитета, позволяет глубже понять механизм работы иммунитета в норме и причины сбоев в этом механизме, характерные для различных патологий. Врожденный и приобретенный иммунитеты. Защита организма от различных патогенных бактерий, вирусов, грибов, а также злокачественных образований осуществляется различными клетками иммунной системы. Приобретенный иммунный ответ опосредован в основном действием Т и Влимфоцитов, имеющих клональнораспределенные антигенные рецепторы, что позволило обозначить данный вид иммунитета как специфический 13. В результате соматической реорганизации генов иммуноглобулинов образуется около й клонов Влимфоцитов, на поверхности которых экспрессируются различные антигенные рецепторы. Клональная селекция Тлимфоцитов приводит к получению большого количества различных клонов лимфоцитов, специфически узнающих только определенный антиген. Т и Влимфоциты распознают антиген в комплексе с МНС класса, представленный на поверхности антигенпрезентирующих клеток АРС, в результате чего клоны лимфоцитов, имеющие рецептор соответствующей афинности, пролиферируют и развиваются в эффекторные клетки Тхелперы, Ткиллеры, плазматические Вклетки. Такой механизм распознавания антигена, известный как клональная селекция, коренным образом отличает приобретенный иммунитет от врожденного неклонального, неспецифического иммунитета 1,3. Влимфоцитов, естественных киллеров 1,3, 4. ДНК, объединенные общим термином РАМР патогенассоциированный молекулярный паттерн 1, 2, 4, 5. Роль таких клеток состоит в индукции первичного иммунного ответа или воспаления. Этот ответ индуцируется при взаимодействии РАМР с паттернраспознающими клеточными рецепторами 1,2, 5. Пептидогликанраспознающие белки. Пептидогликан это основной компонент клеточной стенки практически всех бактерий 6 и, следовательно, он является великолепной мишенью для распознавания эукариотической системой врожденного иммунитета. Действительно, пептидогликан вызывает сильный антибактериальный ответ у насекомых и активирует моноциты, макрофаги и Влимфоциты у млекопитающих. Активация пептидогликаном макрофагов и моноцитов у млекопитающих проводится посредством двух патернраспознающих рецепторов 7 и 2 i 2 , что приводит к производству большого количества индукторов воспаления цитокинов и хемокинов 7, , . Эти пептидогликаниндуцированные медиаторы способны воспроизводить большинство основных клинических проявлений бактериальных инфекций, включая жар, воспаление, лейкоцитоз, гипотонию, недомогание, сонливость, снижение аппетита и артрит . В году . и др.