Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Ходаков, Дмитрий Андреевич
03.00.03, 03.00.23
Кандидатская
2009
Москва
100 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
ОГЛАВЛЕНИЕ
Принятые сокращения
Введение
Литературный обзор
Гемотрансмиссивные инфекции: возбудители и их идентификация
Характеристика основных инфекционных агентов, передающихся через кровь
Вирус иммунодефицита человека (HIV)
Вирус гепатита С (HCV)
Вирус гепатита В (HBV)
Т-лимфотропные вирусы человека I и II типов (HTLV-1,2)
Вирус Эпштейна-Барр
Вирусы простого герпеса 1 и 2 типов
Цигомегаловирус
Вирусы герпеса человека 6, 7 и 8 типов, парвовирус В19
Проблема безопасности донорской крови
Методы идентификации возбудителей гсмотрансмиссивных инфекций
Серологические методы идентификации возбудителей
гемотрансмиссивных инфекций
Методы идентификации возбудителей гемотрансмиссивных инфекций,
основанные на обнаружении нуклеиновых кислот
Амплификационные методы в скрининге донорской крови
Амплификационные методы количественного определения нуклеиновых кислот
Количественное определение нуклеиновых кислот по “конечной точке”
Способы регистрации продуктов амплификации нуклеиновых кислот
Количественное определение нуклеиновых кислот методом амплификации
с регистрацией результатов в режиме реального времени
Материалы и методы
Результаты и обсуждение
Метод мультиплексной qPCR на микрочипе
Обработка данных кинетики накопления флуоресцентного сигнала
Выбор оптимальных условий проведения мультиплексной РСЯ на
микрочипе и регистрации продуктов амплификации
Количественная мультиплексная РСЯ на микрочипе
Выбор генетических мишеней для обнаружения вирусных нуклеиновых
кислот
Определение пределов обнаружения вирусных нуклеиновых кислот
Калибровочные кривые для количественного определения нуклеиновых
кислот
Одновременный количественный анализ нуклеиновых кислот Ы1У-1, НВV
и НСУ методом qPCR на микрочипе
Исследование образцов плазмы крови человека методом мультиплексной qPCR
на микрочипе
Заключение
Выводы
Благодарности
Список литературы
Принятые сокращения
5'-UTR- 5 - нетранслируемый регион (5'- Untranslated Region) b-DNA - метод разветвлённой ДНК (branched DNA)
CMV - цитомегаловирус (Cytomegalovirus)
Ct - пороговый цикл флуоресценции (Threshold Cycle) dNTPs -2’-дезоксинуклеозидтрифосфаты (2’-deoxyribonucleozide triphosphates)
EBV - вирус Эпштейна-Барр (Epstein - Barr virus)
ELISA - ферментативный иммуносорбционный анализ (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
FRET - флуоресцентный резонансный перенос энергии (Fluorescence Resonance Energy Transfer)
HBV - вирус гепатита В (Hepatitis В Virus)
HCV — вирус гепатита С (Hepatitis С Virus)
HIV-1 - вирус иммунодефицита человека тип 1 (Human Immunodeficiency Virus type 1)
HSV-1 и HSV-2 - вирусы простого герпеса 1 и 2 типа (Herpes Simplex Virus 1 and 2)
HTLV-1, HTLV-2 - Т-лимфотропные вирусы человека 1 и 2 типов (Human T-lymphotropic virus)
IgM и IgG — иммуноглобулины классов M и G (Immunoglobulin М, G)
LCR — лигазная цепная реакция (Ligase Chain Reaction)
MRSA - метициллин-устойчивый золотистый стафилококк (Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus)
NASBA — последовательность-специфичная амплификация нуклеиновых кислот (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification)
NAT — методы изучения нуклеиновых кислот (Nucleic Acid Testing)
PCR - полимеразная цепная реакция (Polymerase Chain Reaction) qPCR - количественная полимеразная цепная реакция с регистрацией результатов в режиме реального времени (quantitative PCR) RT-PCR - полимеразная цепная реакция, совмещённая с обратной
транскрипцией (Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction) SNP - одиночный нуклеотидный полиморфизм (Single Nucleotide Polymorphism)
одному из локус-специфичных праймеров на 5’ конец добавляется универсальная адаптерная последовательность, служащая матрицей для отжига и экстендирования универсального флуоресцентно меченного АпзрІШиог праймера.
Аллель-специфичные праймеры данной конструкции также применяются для анализа точечных мутаций [106, 107].
Было показано, что праймеры, имеющие шпилечно-петлевую структуру и содержащие один флуорофор, присоединённый к С5-атому тимидина (Рисунок 6), при включении в РСЯ-продукт позволяют получить более высокие сигналы флуоресценции (ЬиХ-праймеры). Однако должны выполняться два основных правила для работы данной системы: тимидин, несущий молекулу флуорофора, должен располагаться во второй-третьей позиции от 3’-конца праймера, а сам праймер должен заканчиваться 3’-концевым динуклеотидом вС или СО [108, 109]. Было продемонстрировано
<§) А
Рисунок 4. Схема амплнфикашш и выявления продукта реакции с помощью универсального праймера АтрНПиог. II - репортер флуоресценции, <2 - тушитель флуоресценции, А - 5’-универсальная адаптерная последовател ышеть.
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Изменение аллостерической регуляции N-ацетилглутамат синтетазы и карбамоилфосфат синтетазы Escherichia coli методом комбинаторного мутагенеза | Котлярова, Вероника Александровна | 2006 |
Фрагменты гемоглобина, стимулирующие пролиферацию нормальных и трансформированных клеток млекопитающих in vitro | Сазонова, Ольга Владимировна | 2006 |
Индодикарбоцианиновые красители для флуоресцентного маркирования олигонуклеотидов и белков | Кузнецова, Виктория Евгеньевна | 2008 |