Молекулярно-генетическая идентификация и дифференциация герпесвирусов человека

• Автор: Круглова, Анна Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 87 с. : ил.

Содержание.

Список сокращений.

Введение.

Глава 1.Обзор литературы

1.1 .Общая характеристика герпесвирусов.

1.2. Строение и вариабельность генома герпесвирусов человека

1.3. Клиническая характеристика герпесвирусных инфекций.

1.4. Значение герпесвирусов в урогенитальной патологии

1.5. Значение герпесвирусов в трансплантологии

1.6. Латентность герпесвирусов

1.7. Методы диагностики герпетических инфекций

Глава 2. Материалы и методы
2.1. Характеристика клинических образцов
2.2. Штаммы вирусов и контрольные ДНК.
2.3. Выделение ДНК
2.4. Подбор праймеров.
2.5. Полимеразная цепная реакция
2.6. Рестрикционный анализ
2.7. Секвенирование.
2.8. Статистическая обработка данных
Глава 3. Результаты исследований.
3.1. Конструирование диагностических систем для комплексной детекции герпесвирусов человека.
3.1.1. Выбор генетической мишени для комплексной детекции герпесвирусов
3.1.2. Конструирование ПЦРсистемы для комплексной детекции вируса простого герпеса 1 и 2 типа ВПГ 1 и 2, цитомегаловируса ЦМВ, вируса ЭппггейнаБарр ВЭБ и вируса герпеса человека 8 типа ВГЧ
3.1.3. Проверка работоспособности праймеров и оптимизация условий проведения ПЦР
3.1.4. Анализ рестрикционного полиморфизма амплифицируемого универсального фрагмента гена ДНКполимеразы вирусов ВПГ1, ВПГ2, ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ
3.1.5. Конструирование ПЦРсистемы для комплексной детекции и
дифференциации вирусов герпеса человека 6 и 7 типа ВГЧ6 и 7
3.2. Изучение видового многообразия гернесвирусов человека, выявляемых
в биоматериале медицинского значения
3.2.1. Определение аналитической и диагностической чувствительности систем Пентагерп и Герп
3.2.2. Сравнение способов обработки клинического материала для ПЦРанализа.
3.2.3. Значение комплексного выявления герпссвирусов в клиническом материале урологического и гинекологического профиля
3.2.4. Определение частоты встречаемости герпесвирусов у доноров аллотрансплантанта почки. Изучение особенностей течения раннего посттрансплантационного периода у реципиентов, получивших органы от
инфицированных доноров
Глава 4. Обсуждение результатов.
Выводы.
Список литературы


Содержание. Список сокращений. Введение. Глава 1. Общая характеристика герпесвирусов. Клиническая характеристика герпесвирусных инфекций. Глава 2. Штаммы вирусов и контрольные ДНК. Подбор праймеров. Секвенирование. Глава 3. Результаты исследований. Конструирование диагностических систем для комплексной детекции герпесвирусов человека. Сравнение способов обработки клинического материала для ПЦРанализа. Определение частоты встречаемости герпесвирусов у доноров аллотрансплантанта почки. Глава 4. Обсуждение результатов. Выводы. Список литературы. Перечень сокращений. ПДРФ полиморфизм длины рестрикционных фрагментов. ПЦР полимеразная цепная реакция. Введение. В своей практической деятельности врачи многих специальностей встречаются с заболеваниями, вызванными вирусами группы герпеса. В настоящее время известно 8 видов герпесвирусов человека. Герпесвирусы являются у человека возбудителями таких заболеваний как оральный и генитальный герпес, ветряная оспа и опоясывающий лишай, цитомегалия, лимфома Беркита и инфекционный мононуклеоз. В последнее время с герпесвирусами связывают атеросклероз и ИБС, ревматоидный артрит, рассеянный склероз. По данным ВОЗ около населения земного шара инфицировано одним или несколькими герпесвирусами. Первичное инфицирование, как правило, происходит в детском возрасте, после чего герпесвирус переходит в латентное состояние, которое характеризуется отсутствием вирусной репликации и экспрессией вирусных белков. Реактивация герпесвирусов из латентной формы происходит на фоне стрессов, эндокринных нарушений, у больных с первичными и вторичными иммунодефицитами, а также проходящих иммуносупрессорную терапию например, после трансплантации органов. У больных с иммунными нарушениями не только высок риск развития герпетической инфекции и отмечается ее более тяжелое течение, но и показана более высокая частота появления резистентных штаммов, что затрудняет проведение противовирусной терапии. На сегодняшний день существует ряд методов диагностики герпетической инфекции выявление антигенов при помощи иммуноферментного анализа, серологическая диагностика или изоляция вируса в культуре клеток, но в последние годы все большее внимание уделяется молекулярногенетическим способам диагностики. Большинство из них построено на принципе полимеразной цепной реакции ПЦР. Несовершенство таких способов диагностики отчасти связано с моноспецифическим характером систем детекции, которые не обеспечивают выявление всего многообразия видов герпесвирусов, вовлекаемых в развитие патологических состояний. В связи с этим разработка новых методов комплексной детекции и дифференциации, основанных на современных знаниях генетического видового разнообразия герпесвирусов при различных патологических состояниях является актуальной задачей фундаментальной и практической вирусологии. Цель и задачи исследования. Целью работы явилась разработка молекулярногенетических подходов для комплексной детекции и дифференциации герпесвирусов человека, позволяющих решать широкий круг научнопрактических задач медицинской вирусологии. Проведение компьютерного анализа современных баз данных нуклеотидных последовательностей геномов герпесвирусов для выбора наиболее консервативной генетической области. Подбор праймеров и конструирование диагностических системы для комплексной детекции вирусов герпеса человека, основанных на методе ПЦР. Подбор методов межвидовой генетической дифференциации герпесвирусов, основанных на своеобразии нуклеотидных последовательностей выбраной генетической области. Изучение генетической стабильности выбранной мишени в природной популяции герпесвирусов. Клонирование амплифицируемой генетической области всех герпесвирусов и создание банка контрольных матриц. Оределение специфичности и чувствительности разработанных диагностических систем. Изучение роли комплексного выявления герпесвирусов при урогенитальной патологии.