Транскрипция повторяющихся последовательностей В1 и В2 генома мыши

• Автор: Леках, Ирина Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 110 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Прерывистые гены эукариот

2. Низкомолекулярные РНК.

3. Повторяющиеся последовательности генома

эукариот

За. Длинные повторяющиеся повледовательности

. Короткие повторяющиеся последовательности

Глава П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Клоны.
2. Введение метки в ДНК
3. Клетки
4. Введение радиоактивной метки.
5. Выделение ядерной и цитоплазматической РНК
из клеток асцитной карциномы Эрлиха.
6. Выделение ядерной, цитоплазматической и полисомной РНК из печени мышей и плазмоцитомы М0РС4Е.
7. Дополнительная очистка препаратов РНК.
8. Выделение полиА содержащей РНК на поли Асефарозе
9. Электрофорез РНК в агарозном геле.
. Приготовление диазобензилоксиметил ДБМ бумаги.
. Перенос РНК на ДБМбумагу.
. Гибридизационные эксперименты.
. Контактная гибридизация.
. Элюция РНК из агарозного геля.
. Посадка ДНК на нитроцеллюлозные фильтры
. Гибридизация РНК с нитроцеллюлозными фильтрами
. Элюция гибридов и обработка их РНКазой
. Электрофорез РНК в геле полиакриламида с мочевиной
. Определение длины полиАпоследовательностей.
. Радиоавтография
. Просчет радиоактивности в пробах
. Реактивы и материалы.
Глава Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Исследование гомологии повторяющихся последовательностей В1 и В2 с малыми ядерными и цитоплазматическими РНК
2. Изучение характера транскрипции повторяющихся последовательностей В1 и В2 4
3. Доказательство наличия полиАпоследовательнос
тей в составе малых В2 РНК .
4. Исследование малых В1 и В2 РНК с помощью электрофореза высокого разрешения
5. Изучение путей биосинтеза малых В1 и В2 РНК.
Глава 1У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Степень повторяемости различных последовательностей генома варьирует весьма значительно. На основании этого можно выделить основные классы повторяющихся последовательностей. Высокоповторяющиеся последовательности сателлитная ДНК ТО6 копии на гаплоидный геном. Умеренно повторяющиеся последовательности . Уникальные и слабоповторяющихся последовательности. Рассмотрим особенности строения уникальных генов эукариот. В последние годы, благодаря современным методам исследования генома молекулярное клонирование, рестрикционный анализ, анализ первичной структуры было обнаружено прерывистое строение генов эукариот. Оказалось, что внутри генов последовательности ДНК, кодирующие белки, дискретны и разделены другими некодирующими последовательностями . Гилбертом была предложена терминология, согласно которой расчленяющие последовательности получили название интронов, а дискретные участки структурных генов экзонов. Впервые прерывистость генов была показана на вирусах животных V и аденовирусах. Однако, в этих случаях наблюдалась только прерывистость нетранслируемой последовательности на 5конце мРНК, тогда как часть гена, кодирующая белок, была непрерывной как у прокариот. Прерывистое строение кодирующего участка ДНК впервые было показано для генов р глобина мыши и кролика ,9. Эти гены содержат по два интрона, один из которых расположен в 5концевой нетранслируемой части мРНК и в случае мыши имеет размер 5 нуклеотидов, а второй, большой интрон, находится в районе 45 кодонов структурной части гена и имеет размер 0 нуклеотидов. Аналогичная структура была установлена дляз глобиновых генов человека , цыпленка и ксенопуса. Интересно отметить, что расположение интронов во всех исследованных глобиновых генах одинаково, но размеры их могут заметно варьировать. ДвухИнтронная структура продемонстрирована и в случае других ГЛОбИНОБЫХ генов 6 , При рестрикционном анализе гена овальбумина курицы в его составе было выявлено 7 интронов . Один из них расположен в начале гена до инициирующего кодона, а остальные расчленяют структурную последовательность гена. Общая протяженность гена, прерываемого семью нитронами, более чем в три раза превышает размер овальбуминовой мРНК, длиной в нуклеотидов. Такие белки куриного яйца, как овомукоид и лизоцим токе являются прерывистыми , 2. К одним из первых генов, для которых была показана интронированность относятся и гены, кодирующие иммуноглобулины Гены легких цепей содержат два интрона, тяжелых 5. НУ . Пока еще трудно очертить четкие границы распространения прерывистости генов среди разных организмов и типов генов. По чисто методическим причинам относительная легкость выделения мРНК до последнего времени изучались гены, продуцирующие большие количества белка и экспрессированные только в определенных высокодифференцированных тканях. Но в настоящее время получены данные, подтверждающие прерывистое строение и тех генов, которые продуцируют относительно беднопредставленные белки. Так, например, два гена мыши, кодирующие ферменты, содержат интроны Пч , как и ген В настоящее время установлена прерывистость таких генов как гена соматотропина быка 6, тиреоглобулина крысы , препроэнкефалина человека ИЗ, пролактина крысы , актина морского ежа и многих других. На основании этих данных можно сделать предварительные выводы о том, что большинство генов содержит интроны, Большая часть изученных прерывистых генов относится к генам млекопитающих и птиц. Пока не обнаружена прерывистость генов у рыб, рептилий и большинства беспозвоночных. Показано наличие интронов в генах, кодирующих актин у морского ежа, дрозофилы, дрожжей , фиброин тутового шелкопряда III и в неидентифицированном гене диктиостелиума . Известны и гены, в структуре которых отсутствует прерывистость. Это гистоновые гены ,3 морского ежа, дрозофилы первым исключением является НЗ гистон цыпленка , ген, активирующийся при тепловом шоке у дрозофилы А6, ген кальмодулина крысы . НО и интерферона человека , многие гены дрожжей.