Регуляция экспрессии генов коровой части острова патогенности бактерий рода Yersinia транскрипционным регулятором YbtA

• Автор: Анисимов, Роман Львович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 85 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
В В Е Д Е Н И Е . Сндсрофоры . Утилизация железа в бактериях пода ii . Особенности строения энтеробактерий . Системы утилизации железа в . Транслокация сидерофоров через клеточные . I элемент промоторауЫА . Оборудование. Бактерии. Плазмиды. Бактериальные спелы н антибиотики, использованные в работе 3. Бактериальные среды . Антибиотики
. Использованные станлаптныс молекулярнобиологические и биохимические методы. Полимеразная Цепная Реакция ПЦР . Выделение ПЦРфрагментов 5. Выделение РНК н реакция удлинения праймера. Выделение РНК . Реакция удлинения праймера. Измерение концентрации белка . Электрофорез бел ков в полиакриламидном геле. Конструирование эксппссснонноП плазмиды пЕТЗеУЫА. Очистка УЫА

7. Экспрессия в . Хроматографическая очистка УЫА . Конструирование репортерпых плазмид, несущих оригинальные промоторы генов НР1. Внесение делений в промоторы репортернмх плазмид. Очистка йепсипиабактииа. I футнпинтинг. I . Взаимодействие с промотопамнмншенямн . Выделение . Специфические связывающие участки . Выделение йсрсиннабакгина. Опенка влияния йерсиниабактина на взаимодействия и ДНК. Iзлемсит промоторов i6 и . Функция сайтов связывания . Обсуждение. Экспрессия промоторов в мутантах дефективных по различным компонентам системы утилизации железа . ВЫВОДЫ гм1мммннмиммм1нммнм1нммнмммпмннт1н1мнтннт1н1мимм1мминмиммм1нм СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ
Патогенные микроорганизмы в среде организма хозяина сталкиваются с условиями недостатка железа, которое находится в комплексах с железосвязывающими белками, такими как трансферрин и лактофсррин. Как часть неспсцифичсской иммунной защиты, доступность свободного железа может быть еще более уменьшена осуществляемым лактоферрином транспортом железа в клетки печени . Чтобы выживать при железодефицитных условиях, микроорганизмы используют различные механизмы утилизации железа. Один из них
производство низкомолекулярных хелаторов с высоким сродством к также известных как сидсрофоры. Таким образом, биосинтез сидерофора может быть расценен как важный фактор вирулентности i . Это особенно верно для рода ii, поскольку только члены высокопатогенной
группы , , . Этот кластер был назван Островом патогенности i ii I, I i . Предположительно, основную роль в
регуляции экспрессии генов острова играет транскрипционный регулятор , Xi подобный белок, кодируемый геном в составе этого же острова . Как было показано в экспериментах с мутантами, активирует экспрессию биосинтетических и транспортных генов I, но в то же время репрессирует свой собственный ген. Изучение регуляторных механизмов является одной из фундаментальных задач молекулярной биологии. Однако, несмотря на важное медицинское значение изучения системы утилизации железа у ii, она до сих пор является черным ящиком и реальные молекулярные механизмы ее регулирования неизвестны. С года, когда была указана необходимость прямых экспериментов . I.
Пслыо настоящей работы являлось изучение регуляции генов Острова Патогенности. Научная новизна работы. Впервые были охарактеризованы регулируемые промоторы I, выделен гомогенный и определены сайты связывания . Кроме того, была предложена модель, позволяющая объяснить способность быть как активатором транскрипции, так и репрсссором. Научнопрактическое значение работы. Изучение регуляторных механизмов
лежит в основе молекулярной биологии, поэтому результаты данной работы имеют фундаментальное значение, расширяя познания в этой области. Показано, что кроме ранее предположенной пары нуклеотидных повторов 1 и 2 в каждом промоторе, был идентифицирован дополнительный сайт связывания 3 в дивергентно транскрибируемом промоторе i6. На основании экспериментов с репортерными плазмидами было установлено, что повтор 3 играет ключевую роль в репрессии промотора уЫА. Сравнивая i6 промоторы . Iэлемснта в 2 последовательности промотора ii уЫААгрб увеличивает экспрессию уЫА. Кроме того, было продемонстрировано существование возможных дополнительных регуляторных механизмов, универсальных для всех промоторов системы утилизации йсрсиниабактина.