β-Эндорфинподобный пептид иммунорфин: свойства и механизм действия

• Автор: Малкова, Наталья Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 121 с.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Биологически активные пептиды иммуноглобулинового происхождения

1.1. Тафцин, его свойства и синтетические аналоги

1.2. Ригин и его свойства

1.3. Бспептиды и их свойства

1.4. Иммунокорнш н его свойства

2. Биологически активные пептиды фрагменты гемоглобина.

2.1. Геморфины и их свойства.
2.2. Неокиоторфин и его свойства.
3. Биологически активные пептиды, выделенные из альбумина
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава 1. Материалы и методы
1. Реактивы
2. Экспериментальные животные
3. Штамм бактерий
4. Клеточные линии.
5. Среды для работы с культурами клеток
6. Синтетические пептиды.
7. Методы выделения и оценки функциональной активности иммунокомпетентных клеток
7.1. Выделение Тлимфоцитов человека из периферической крови.
7.2. Выделение спленоцитов мыши
7.3. Оценка бласттрансформации спленоцитов и Тлимфоцитов по включению метил3Н1тимиднна в клетки
7.4. Получение макрофагов брюшной полости мыши
7.5. Определение способности макрофагов к адгезии.
7.6. Определение способности макрофагов к распластыванию
7.7. Определение фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов i vi
7.8. Культивирование лейкемических линий человека и мыши i vi
7.9. Оценка ростовой активности лейкемических клеток по включению метил3Нтимидина в клетки
7 Изучение спонтанной миграции мышиной макрофаглодобной линии iЗ из капли агарозы
7 Культивирование доимплантационных зародышей мыши
7 Получение фракций синаптических мембран головного мозга крысы.
7 Определение кинетических характеристик взаимодействия изучаемых пептидов с рецепторами методом радиол i андного анализа.
7 Изучение противоопухолевой активности иммунорфина и иммунорфннабЮ i viv.
7 Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 2. РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ
2.1. Влияние эндорфина, иммунорфина и МеСэнкефалина на активность Тлимфоцнтов человека i vi
2.1.1. Влияние эндорфина, иммунорфина и Меэнкефалина на индуцированную Кон А пролиферацию Тлимфоцитов человека i vi
2.1.2. Связывание мечеиых рэндорфнна и иммунорфина
с Тлимфоцнтамн человека
2.2. Влияние иммунорфина6 на активность Т и Влимфоцнтов селезенки
мыши i viv
3. Влияние эндорфина, иммунорфина и иммунорфинабЮ на активность перитонеальных макрофагов мыши i vi и i viv.
3.1. Влияние иммунорфина6, его циклического аналога па адгезию и распластывание перитонеальных макрофагов мыши i vi
3.2. Влияние иммунорфшабО и его циклического аналога на бактерицидную активность перитонеальных макрофагов мыши против вирулентного штамма ii 5 i vi.
3.3. Влияние иммунорфина и эндорфина на спонтанную миграцию клеток мышиной макрофагподобной линии iЗ из капли агарозы i vi.
3.4. Влияние иммунорфинабЮ на активность перитонеальных макрофагов мыши i viv
4. Влияние зндорфина и иммунорфина на рост лейкемических клеточных линий человека i vi
5. Иммунорфи связывается с налоксоннечувствительным рецептором рэндорфмна на мембранах мозга крысы.
6. Изучение противоопухолевой активности иммунорфина и его фрагмента i viv на моделях солидной перевиваемой меланомы В и асцитного лейкоза Р8.
7. Влияние имму норфина на доимплантационное развитие зародышей мыши. ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ.
3.1. Влияние эндорфнна, иммунорфина и сю фрагментов на активность клеток иммунной системы
3.2. Иммунорфнн селективный агонист налоксоннсчувсгвителыюго рецептора эндорфина
3.3. Влияние иммунорфина на донплантационное развитие зародышей мыши.
3.4. Существуют ли рэидорфинподобные пептиды иммуноглобулиновог о происхождения i viv.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Изучение влияния иммунорфина, его фрагментов и аналогов па активность иммунокомпетентных клеток человека и мыши i vi и i viv. Исследование рецепции иммунорфина и его фрагментов иммунокомпетентными клетками человека и мыши. Изучение влияния иммунорфина на доимплантационное развитие зародышей мыши i vi. Работа выполнена в лаборатории Клеточной инженерии Института молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН и лаборатории Химии белка Филиала Инстигута биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН в соответствии с планом научноисследовательских работ. Научная новизна. Представленные в настоящей работе результаты являются первым эксперментальным доказательством того, что рэндорфинподобный пептид иммунорфин, соответствующий аминокислотной последовательности тяжелой цепи I человека, обладает иммуностимулирующими свойствами. Установлено, что иммунорфин увеличивает пролиферацию стимулированных конканавшшном А Тлимфоиитов и Тлимфобластных лейкемических линий человека и МТ4. Показано, что это действие опосредовано через налоксоннечувствитсльный неопиоидный рецептор эндорфина. Впервые изучено влияния иммунорфина6 на активность клеток иммунной системы i viv. Показано, что внутрибрюшинное введение пептида мышам, приводит к стимуляции перитонеальных макрофагов, а также Т и Влимфоцитов селезенки. Приоритетными являются результаты исследования с помощью 1меченого иммунорфина налоксоинечувствителыюго рецептора эндорфина на мембранах мозга крысы. Впервые показано, что иммунорфин стимулирует деление бластомеров и ускоряет развитие доимплантационных зародышей мыши на ранних стадиях. Практическая ценность результатов работы. В настоящее время биологически активные пептиды, производные природных пептидов и белков, рассматривают как потенциальные лекарственные средства нового класса, поэтому такие свойства иммунорфина как способность увеличивать бактерицидную активность макрофагов и стимулировать деление бластомеров и ускорять развитие доимплантационных зародышей мыши могут привлечь внимание фармакологов и клиницистов. Поскольку иммунорфин является селективным агонистом неопиоидного не чувствительного к налоксону рецептора эндорфина он может быть успешно использован для выявления и исследования данного типа рецептора на различных типах клеток. Внутрибрюшинное введение иммунорфинабЮ мышам приводит к возрастанию активности перитонеальных макрофагов, Т и Влимфонитов селезенки. Меченные ,Ь1 иммунорфин и иммунорфинбЮ с высоким сродством и специфичностью связываются с неопиоидными не чувствительными к налоксону рецепторами 3эндорфина на Тлимфоцитах человека, а также на синаптических мембранах коры больших полушарий головного мозга крысы. Иммунорфин усиливает рост клеток Тлимфобластных лейкемических линий человека и МТ4 i vi. Иммунорфин стимулирует деление бластомеров и ускоряет развитие зародышей мышей на ранних стадиях. В его присутствии среде культивирования до стадии бласгоцисты развивается в 1,6 раза больше зародышей, чем в контроле. Часть 1. В г. Найяр и Нишиока впервые обнаружили, что при расщеплении специфическими ферментами лейкофильной фракции I образуется пептид, способный стимулировать фагоцитарную функцию макрофагов. Этот пептид был назван тафцином , ii, . Спустя два года Найяр и соавт. Оказалось, что эндогенный и синтетический тафцин в одинаковой степени стимулировали такие функции полиморфонуклеарных лейкоцитов, как миграция, фагоцитоз бактерий и латекса, противоопухолевую активность , , i, , . На основании этих результатов была сформулирована гипотеза о том, что функциональные белки могут содержать потенциально биологически активные аминокислотные последовательности. Открытие Брантлом и соавт. В настоящее время биологически активные пептиды обнаружены в I тафцин , ii, и р , i, а гемоглобине геморфины и киоторфины . Ivv . Долгое время возможность образования таких пептидов i viv ставилась под сомнение, однако дальнейшие исследования в данной области подтвердили наличие в организме млекопитающих эндогенного тафцина , , и геморфинов . В г. Чипенс и соавт. Чипенс и др.