Трансактивационные свойства антионкогена р53 в различных культурах клеток: разработка эффективной репортерной системы для количественной оценки активности р53

• Автор: Струнина, Светлана Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 136 с. : ил.

Содержание

Список сокращений.

Таблица сведений о химиотерапевтических препаратах, использующихся в работе

Введение.

Обзор литературы

1. Характеристи ка гена р.

2. Характеристика белка р.

2.1. Структура белка р.

2.2. Внутриклеточная локализация р.

2.3. Регуляция деградации р в клетке.

3. Участие р в различных клеточных процессах

4. Участие р в регуляции транскрипции.
4.1. Трансактивационные свойства р.
4.1.1 Мишень р ген рАПС1р1.
4.1.2 Мишень р ген т1т2 1к1т2.
4.2 Клеточные гомологи р белки рбЗ и р.
4.2. Репрессирующая активность р.
4.3 Методы оценки трансактивирующей способности р
5. Конформационные изменения р и вызывающие их факторы, отвечающие за функциональную активность р.
6. Воздействия, приводящие к активации р
7. Влияние р на клеточный цикл и апоптоз
8. Нарушения функции р в опухолях.
Материалы н методы
1. Получение компетентных клеток ОН5а Е.СоП и бактериальная трансформация плазмидной ДНК
2. Препаративное выделение плазмидной ДНК.
3. Аналитическое выделение плазмидной ДНК.
4. Обработка ДНК рестрикционными эндонуклеазами рестриктазами.
5. Получение векторной ДНК и олигонуклеотидных вставок
6. Реакция лигирования
7. Отжиг и достройка олигонуклеотидов фрагментом Кленова
8. Получение ретровирусных векторов, несущих репортерные гены.
9. Клеточные культуры и условия их культивирования
. Введение илазмидной ДНК в эукариотические клетки.
. Определение концентрации тотального белка в клеточном лизате методом Бредфорд.
. Определение ргатактозидазы
. Определение щелочной фосфатазы.
. Разделение и обнаружение белков
. Выделение тотальной РНК из эукариотических клеток
. Определение РНК в образцах методом гибридизации.
. Определение процента апоптирующих клеток.
Результаты и их обсуждение.
1. Создание самоинактивирующихся ретровирусных конструкций, несущих различные гены, для оценки транскрипционной активности р в клетках.
2. Проверка системы рзависимой активации искусственного промотора.
3. Разработка метода количественного измерения транскрипционной активности белка р
4. Сравнительный анализ трапсактивационных свойств р в различных культурах клеток.
5. Применение рзависимых репортерных систем для поиска химических
реактиваторов р в опухолевых клетках
Выводы.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
Список литературы


Рак кожи, толстой кишки, прямой кишки, молочной железы, желудка, печени, матки, яичников, мочевого пузыря. Дозы мгкгст мктмлот внутривенно в течение нскольких дней, 1 гм2сут 8 мкгмлсут внутривенно капельно постоянно в течение 0 ч 45 сут Метастазирующие формы рака яичников или рака молочной железы Дозы монотерапия в дозе 5 мгм 1. Схпап Рагпо Ммсплання, инсдиамиоднхлооплатина См. Механизм действия связан со способностью алкилировать нити ДНК сшивать их между собой, угнетает синтез ДНК. Формирует комплексы в основном с трехвале1гтными ионами железа и алюминия в меньшей степени связывает двухвалентные ионы. Образуя хслаты со свободным железом из ферритина и гсмосидсрина, но не из гемоглобина и железосодержащих ферментов, а также с алюминием, связанным в тканях, дсфероксамин обеспечивает выведение этих ионов из организма, что приводит к уменьшению патологических отложений железа и алюминия в органах. Противоопухолевое средство, содержит центральный атом платины, соединенный с двумя аммониевыми радикалами в цисположении. Комплексообразующее соединение. Гсрминогенная опухоль яичка или яичников, рак яичников, рак тела матки, саркома матки, рак шейки матки и фаллопиевых труб, рак яичников, рак почечной лоханки и мочеточников, рак мочевого пузыря и уретры, рак простаты и полового члена, остеогенная и мягкотканная саркомы, саркома Юинга, иейробластома, ретинобластома, лимфома, хорионкарцинома матки, медуллобластома, рак кожи, меланома, опухоль головы и шеи, рак пищевода, рак легкого, рак желудка, рак толстой кишки, злокачественная тимома, мезотелиома. Лозы мгм2 0. Трансфузионнын гемосидсроз особенно при таласссмии и других хронических анемиях. Острое отравление препаратами железа в составе комбинированной терапии. Проведение диагностического теста для определения патологических отложений железа или алюминия. Дозы 0. В крайних случаях внутривенно капельно не более игкг в час. РАЬАРАЬАоЬо5оЬопоасеМЬахпага1с . ХфосфонацстнлЬаспарашноваи кислота Снж е 0 и к гмл Ьчгохуигеа Нлсгеа, Возиргеззп, Нсгх, убгохусагЬашсит, Нусига, Лаг. Потенцирующий эффект Ра1а связан с угнетением фермента аспартат транскарбамилазы, засчст чего тормозится синтез цитозин и уридин трифосфатов. Механизм противоопухолевого действия связан со способностью соединения ингибировать рибонуклсозиддифосфатрсдуктазу, являющуюся одним из ключевых ферментов, участвующих в биосинтезе ДНК. Не оказывает влияния на синтез белка и РНК. Препарат легко всасывается при приеме внутрь, пик концентрации в плазме крови наблюдается через 12 ч, период полу существования около 2 ч. Проходит через гсматоэнцсфалнчсский барьер. Около выделяется с мочой в течение ч. Используется для повышения терапевтического индекса фторурацила при раке желудка и толстой кишки. Хронический миелолейкоз, лимфогранулематоз, лейкоз, меланома, пустулезный псориаз, эр гтре. СнеддонаУилкинсона, метастазы рака молочной железы, рак яичников, хорнонкарцннома матки, опухоли головы и шеи, опухоль мозга. Дозы внутрь 0. Цитохалазин Р СМ1, 1. Функционально цитохалазины напоминают копирующие белки. Они связываются с оперенным быстро растущим концом актинового филамента и блокируют как присоединение, так и отсоединение субъединиц на этом конце, хотя блокирование может быть неполным. На процесс элонгации актинового филамента с острого медленно растущего конца цитохалазины не влияют. Цнтохалазнны могут также разрезать актииовоые филаменты. Наиболее активным является Цитохалазин Р. Цитохалазины широко используются для исследования живых клеток благодаря тому, что они способны проникать через клеточную мембрану. Один из цитохалазинов группы родственных по химической структуре метаболитов плесневых трибов. Примечание В разделе Название для каждого препарата указана используемая в работе максимальная концентрация смах обработки клеток, для сравнения в разделе Применение даны дозы препаратов приблизительно пересчитанные на 1 мл объема тела, применяющиеся в химиотерапии.