Редокс-зависимая регуляция экспрессии генов, индуцируемых окисью азота

• Автор: Литвинов, Дмитрий Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 101 с. : ил

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ БИОХИМИЯ

И ЗАВИСИМАЯ ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ

1.1. Биохимия

1.1. Образование 0

1.1.2. Образован ие А ФА

1.2. Модификации белков под действием и АФА

1.2.1 Нитрозилирование гемового железа

1.2.2. нитрозация и окисление тиольных остатков

1.2.3. Нитрован ие тирозина

1.3. 0 и АФА чувствительные

сигнальные пути и транскрипционные факторы
1.3.1. МАРпритеинкиназы
1.3.2.
1.3.3. зависимая протеинкиназа ГКО
1.3.4. Тирозиновые протеинкиназы
1.3.5. Транскрипционный фактор 11
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Реактивы
2.2. Синтез
2.3. Ферменты
2.4. Растворы
2.5. Бактериальные среды
2.6. Ошстка фрагментов ДНК в легкоплавкой агарозе
2.7. Трансформация . i плазмидной ДНК
2.8. Выделение плазмидной ДНК из .i
2.9. Вычтенная клонотека
2 Секвенирование кДНК и анализ
нуклеотидных последовательностей
2 Полимеразная цепная реакция ПЦР
2 Культивирование клеток и выделение РНК
2 Электроперенос РНК
2 Получение меченых зондов
2 Гибридизация на мембранах с перенесенной РНК
2 Определение свМР
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выявление генов, индуцируемых 0 анализ вычтенной
клонотеки, обогащенной 0индуцируемыми генами
3.2. Участие АФК в стимуляции экспрессии генов
под действием
3.3. Стимуляция экспрессии генов 1Ь8, ШАР3 и СОХ
при действии каталазы в хондроцитах человека
3.4. сОМР и стимуляция экспрессии генов
каталазой и 0 в хондроцитах
3.5. Роль внутриклеточных сигнальных систем
в Жзависимой экспрессии генов
3.6. Заключение ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Глава 1. Глава 2. Трансформация . Выделение плазмидной ДНК из . Глава 3. Любая клетка должна уметь правильно отвечать на внешние воздействия. Поскольку лишь часть генов экспрессируется конститутивно, клетка должна решать вопрос, в какой степени экспрессировать тот или иной ген. У млекопитающих подобные решения принимаются при участии внутриклеточных сигнальных систем, передающих сигнал с рецепторов на транскрипционные факторы и другие белки, регулирующие экспрессию генов. Именно так клетки отвечают на действие ростовых факторов, цитокинов, химокинов и других сигнальных молекул. Одним из факторов межклеточной сигнализации является окись азота 0. 0 участвует в разнообразных биологических процессах регуляции тонуса кровеносных сосудов, иммунном ответе, агрегации тромбоцитов, возбуждении пресинаптических нейронов. Влияние 0 на экспрессию генов лишь частично связано с непосредственным действием 0 на транскрипционные факторы. В большинстве известных случаев непосредственными мишенями 0 становятся регуляторные белки, контролирующие активность транскрипционных факторов опосредовано. В реакциях с кислородом и активными формами кислорода АФК 0 превращается в активные формы азота АФА. 0 и АФА отличаются по способности реагировать с разными аминокислотными остатками и простетичсскими группами белков, поэтому мишени 0 и АФА различны. Поскольку соотношение 0 и АФА в клетке зависит от концентрации кислорода и АФК, действие 0 модулируется редоксусловиями. В обзоре литературы мы рассмотрим реакции 0 с кислородом и АФК, модификации, производимые 0 и АФА, а также рецепторы 0 и АФА, влияющие на экспрессию генов. Глава 1. Если не считать восстановления до 0 митохондриями, основной источник эндогенного 0 в животных клетках ЫОсинтазы. Известно несколько изоформ, которые различаются но тканевой специфичности и способу регуляции табл. Все они используют аргинин в качестве субстрата и содержат одинаковые каталитические центры Турпаев . Таблица 1. Индуцнбельная i, 02, Гепатоциты. Эндотелиальная , , 03 Эндотелий кровеносных сосудов Внутренняя сторона плазматической мембраны Активация Са в комплексе с кальмодулином обратимое ингибирование РКСа активация протеинюгназой . i . 2 через I3 и , а также и 12 i . .