Получение пептида-мимотопа химических канцерогенов группы полициклических ароматических углеводородов

• Автор: Апалько, Светлана Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 115 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Роль антител в защите организма от химических канцерогенов

1.1.1. Индукция и функции антиканцерогенных антител

1.1.1.1. Индукция антиканцерогенных антител в естественных условиях 1.1Л .2. Индукция антиканцерогенных антител в модельных экспериментах

1.1.2. Механизмы угнетения и стимуляции канцерогенеза антителами

1.1.3. Механизмы взаимодействия антител с полициклическими арома

тическими углеводородами.

1.2. Использование технологии фагового дисплея для получения пеп

тидных лигандов
1.2.1. Использование пептидных фаговых библиотек для картирования
эпитопов рецепторных молекул
1.2.2. Получение пептидовмимотопов непептидных соединений.
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Материалы.
2.2. Методы
Глава 3. Результаты и обсуждение исследований
3.1. Получение и характеристика моноклональных антител к бензоапирену.
3.1.1. Получение и скрининг мышиных гибридом, синтезирующих МО
ноклональные антитела к бензоапирену.
3.1.2. Иммунохимическая характеристика мАТ В2.
3.1.3. Моделирование РаЬфрагмента мАТ В2.
3.2. Получение и характеристика пептидамимотоиа бензоапирена
3.2.1. Аффинная селекция специфических клонов из пептидной фаговой
библиотеки.
3.2.2. Иммунологическая характеристика пептидамимотопа бен
зоапирена
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Цель работы получение пептидамимотопа химических канцерогенов. Получить и охарактеризовать мАТ с заданными свойствами высокой специфичностью к БП и низкой кроссреактивностыо с неканцерогенными ПАУ и эндогенными структурно схожими соединениями. Смоделировать структуру фрагмента полученного мАТ и определить расположение активного центра связывания соединений группы ПАУ. При помощи технологии фагового дисплея получить рекомбинантные клоны бактериофагов, содержащие пептид, специфически взаимодействующий с АТ к БП. Изучить иммунологические свойства пен гидамимотопа БП. Научная новизна. Впервые в России получено мАТ к БГ1 мАТ В2. АТ В2 не уступает зарубежным аналогам, а по специфичности к БП даже превосходит. Полученное мАТ В2 обладает высокой кроссреактивностыо к бензаантрацену БА, вероятному канцерогену для человека, и низким аффинитетом к неканцерогенным структурно схожим веществам. Определены нуклеотидные последовательности ДНК, кодирующие вариабельные фрагменты легкой и тяжелой цепей. АТ В2, транслированы в аминокислотные последовательности, на основе которых построена модель центра связывания мАТ В2. При помощи математического моделирования было определено место и сила связывания мАТ В2 с рядом химических соединений группы ПАУ. На основе полученных моно и поликлональных АТ к БП при помощи технологии фагового дисплея впервые удалось получить пептидмимотоп химических канцерогенов группы ПАУ. Полученный пептидмимотоп, обладает способностью специфически связываться с мАТ В2 и моноспецифическими поликлональными АТ к БП и БА. Пептидмимотоп бензоапирена в составе i белка бактериофага обладает иммуногенными свойствами способностью индуцировать синтез АТ к БП при иммунизации животных. Научнопрактическая значимость работы. Полученный пептидмимотоп БП и БА может быть использован при разработке принципиально новой группы иммунопрепаратов антиканцерогенных вакцин, а также при создании новых диагностических тестсистем на основе иммуноферментного анализа ИФА для определения наличия антиканцерогенных АТ. Замена в таких диагностических системах конъюгатов канцерогенбелок на пептидмимотоп исключит работу с потенциально опасными реагентами. РФ. Апробация работы. Результаты работы доложены на III Международной конференции Фундаментальные науки медицине г. Новосибирск 28 сентября г, IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов г. Новосибирск мая г. V конференции молодых ученых России с международным участием Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины г. Москва мая г. III Троицкой конференции Медицинская физика и инновации в медицине г. Троицк 36 июня г. V Северном социальноэкологическом конгрессе г. Москва апреля г. Международной научнопрактической конференции Новые идеи и решения молодых исследователей в развитии АПК 1е место г. Волгоград мая г. Биологически активные вещества фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения г. Новый свет, Крым, Украина, мая г. Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН Химическая биология Фундаментальные проблемы бионанотехнологии г. Новосибирск, июня г. Апробация диссертации состоялась г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано научных работ. По результатам работы получен 1 патент РФ. Объем н структура работы. Диссертация изложена на 5 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, описание материалов и методов, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы и список используемой литерату ры, содержащий ссылки на отечественных и 2 иностранных источников. Работа иллюстрирована 3 таблицами и рисунками. Данная диссертационная работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научнотехнологического комплекса России на годы по государственному контракту . Получение пептидаиммуномиметика химических канцерогенов группы пол и циклических ароматических углеводородов для иммунопрофилактики рака.