Изменение экспрессии генов, активных в мозге крыс, в условиях фокальной церебральной ишемии под действием семакса и Pro-Gly-Pro

• Автор: Дмитриева, Вероника Германовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 129 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Развитие повреждения при церебральной ишемииII

Гемодинамика в ткани мозга при ишемии

Морфология ткани мозга при ишемии

Молекулярнобиологические аспекты ишемического повреждения

Глутаматкальцневый каскад.

Алоптоз
Реакция генома на ишемию мозга.
Активация генов при ишемии.
Нейротрофины и их рецепторы
Ген .
Ген II1.
Патогенетическая терапия при ишемии мозга.
Оснопные принципы терапии
Семаке и .
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Объект исследования.
Реактивы и оборудование мннмни1нмнм1мн1ннммнмтпиммшнммниамни1м .зб
Растворы, буферы.
Дистальная окклюзия средней мозговой артерии у крыс
Гистологическое исследование срезов .мозга крыс.
Анализ экспрессии генов
Выделение суммарной РНК и обработка ДНКазой
Спсктрофотометрнческос определение количества РНК
Электрофоретическое разделение суммарной РНК в 1.5 агарозном геле.
Синтез одноцепочечной кДНК.
Подбор праймеров.
Обработка ДНК фага . рестрицируюшей эндонуклеазой 1.
Электрофорез продуктов ПЦР в полиакриламидном геле.
Полу количественный анализ продуктов ПЦР.
Полимеразная цепная реакция
Электрофорез продуктов ПЦР в агарозном геле
Подбор условий для полуко шчественного анализа экспрессии мРНК1.
Статистический анализ данных.
ПЦР в реальном времени.
Полимеразная цепная реакция
Обработка результатов
Статистический анализ данных.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Гистологическое исследование срезов мозга крыс с окклюзией
Анализ экспрессии мРНК генов, колирующих псйротрофины и их рецепторы в отделах мозга крыс
под действием семакса и ГОР в условиях фокальной исробралмюй ишемии
Экспрессия гена .
Изменение содержаний мРНК при ишемии
Содержание мРИК при введении семакса
Содержание лгРНК при введении .
Экспрессия гена 3.
Изменение содержания мРНК З при ишемии
Содержание мРНК З в мозге крыс при введении .iикса.
СодержаниемРНК З в мозге крыс при введении
Экспрессия гена .
Изменение содержания мРНК при ишемии.
Содержание мРНК в мозге крыс при введении семакса
Содержание мРНК в мозге крыс при введении
Экспрессия гена .
Изменение содержания мРНК при ишемии
Содержание мРНК а мозге крыс при введении семакса.
Содержание мРНК в мозге крыс при введении .Т
Экспрессия гена .
Изменение содержания мРНК при ишемии
Содержание мРНК в мозге крыс при введении семакса.
Содержание мРНК в мозге крыс при введении .
Экспрессия гена ТгкЛ.
Изменение содержания мРНК ТгкЛ при ишемии
Содержание мРНК в мозге крыс при введении семакса.
Содержание мРНКТгкЛ в мозге крыс при введении .
Экспрессия гена р
Изменение содержания мРНКр при ишемии
Содержание мРИКр в мозге крыс при введении семакса.
Содержание мРНКр в мозгекрыс при введении
Анализ изменения экспрессии гено нейротрофинов и их рецепторов в мозге крыс с ишемией.
Анализ действия семакса и на экспрессию генов нейротрофннов и их рецепторов в мозге крыс
Анализ экспрессии мРНК в отделах мозга крыс под действием семакса п в условиях фокальном церебральной ишемии
Анализ экспрессии мРНК 1 в отделах мозга крыс под действием семакса и в условиях фокальной церебральной ишемии
Анализ действия семакса на экспрессию генов факторов роста и их рецепторов в условиях фокальной ишемии.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Принимая во внимание ноотропные свойства семакса, представляется интересным исследовать его действие на экспрессию гена , кодирующего транскрипционный фактор, запускающий различные генные программы в нервной ткани, лежащие в основе обучения, формирования и распознавания долговременной памяти, синаптической пластичности i . Кроме того, экспрессию гена также связывают с процессами воспаления, апоптоза и пролиферации, имеющими место при ишемическом повреждении нервной ткани . Еще один ген, обнаруженный и охарактеризованный в нашем Отделе, 1 кодирует фермент сфингомиелинсинтетазу 1. ДАГ , i . Несмотря на то, что воздействие ишемии и окспдантного стресса на экспрессию компонентов сфингомиелинового цикла достаточно хорошо изучено, исследовать экспрессию сфингомиелинсинтетазы в условиях ишемии до сих нор не представлялось возможным. Цслыо настоящей работы являлось изучение влияния нейропротективного препарата семакс и его Сконцевого фрагмента на экспрессию мРНК генов нейротрофинов и других факторов роста, их рецепторов, а также генов и в различных участках мозга крыс в условиях экспериментальной модели фокальной ишемии мозга крыс. Провести сравнительный анализ действия семакса и на экспрессию исследуемых генов в мозге крыс. Научная новизна. Впервые исследовано воздействие семакса и на экспрессию генов нейротрофинов, факторов роста и их рецепторов, а также генов и 1 в условиях эксперимснтальнй фокальной ишемии мозга. Впервые показано активирующее действие семакса и на представленность мРНК генов, кодирующих нейротрофины и их рецепторы, в ишемической коре мозга крыс, свидетельствующее о нейропротективных свойствах обоих пептидов. На фоне применения семакса и в лобнотеменной доле коры мозга крыс, включающей очаг ишемии, впервые обнаружено изменение экспрессии мРИК большого числа генов факторов роста и их рецепторов. Функции генов, изменивших свою экспрессию при введении семакса, свидетельствует о его нейропротективном и ноотропном действии, а также указывают на анксиолитические свойства препарата и его роль в формировании сосудов. Выявленная в работе активация экспрессии многих генов факторов роста и их рецепторов при введении , иллюстрирует нейропротектшнюе действие этого пептида. Обнаруженное впервые активирующее воздействие на транскрипцию гена свидетельствует о ноотронных свойствах этого пептида. Новыми являются данные об изменении транскрипции генов нейротрофинов и их рецепторов не только в ишемизированной коре, но также в коре контралатерального полушария и подкорковых структурах обоих полушарий мозга животных, подвергнутых фокальной ишемии. Впервые выявлены изменения транскрипции гена 1 в моз1е животных в условиях экспериментальной ишемии. Установлено, что эффекты семакса и на транскрипцию генов нейротрофинов и их рецепторов совпадают лишь частично, а на экспрессию генов I и существенно различаются. Сделано предположение, что одним из механизмов нейропротекгивного действия семакса и в мозге в условиях ишемии является их воздействие на экспрессию генов системы факторов роста и их рецепторов, обеспечивающих функционирование клеток нервной ткани и сосудов. Результаты исследования воздействия семакса и на экспрессию нейротрофинов, факторов роста и их рецепторов представляют научнопрактический интерес. Выявленное активирующее воздействие семакса на транскрипцию генов нейротрофинов н их рецепторов через 3 и часа после ишемической атаки, обеспечивающих ненропротекцию и выживание нервной ткани, имеет существенное значение при фармакотерапии инсультов. Нейропротсктивные и ноотропные свойства , обнаруженные в исследовании, открывают новые перспективы в использовании пептида для терапии заболеваний нервной системы. Сведения о характере изменениия транскрипции гена ключевого фермента сфингомиелинового цикла, регулирующего воздействие на клетку проапоптотического медиатора церамида в мозге животных, имеют большое значение для дальнейшего изучения механизмов регуляции процессов апоптоза клетки в условиях экспериментальной ишемии. Результаты изучения воздействия семакса и на экспрессию исследованных генов могут найти применение при разработке новых терапевтических подходов.