Молекулярно-генетический анализ нового гена млекопитающих tagL, имеющего структурную гомологию с геном tag7 и фаговыми лизоцимами

• Автор: Кибардин, Алексей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : ил.

Оглавление.
Оглавление

Список сокращений

Введение

Обзор литературы

Врожденный иммунитет.

Проблемы распознавания внелрившихся микроорганизмов

Группы пагтсрнраспознающнх клеточных рецепторов .

Примеры патгсрирасиознающих рецепторов и их функции

Семейство Са2зависимых лектинов

Маннозосвязыпаюший белок МВР

Рецептор маннозы макрофагов ММК
Рецептор
Семейство рецепторов натуральных киллеров
Интсфины.
Рецептор комплемента 3 3.
Лейцинбогатые белки.
Семейство II.
Распознавание бактерий врожденной иммунной сисгемой
Гра м м отри иател ьн ые ба ктери и.
Роль и I4
Роль 4
Граммположительные бактерии.
Заключение.
Материалы и методы.
Ферменты и реактивы
Амплификация фрагмента кДНК .
Амплификация 5 копия кДМК гена .
Амплификация 3 конца кДНК гена .
Плазмндные и фаговые векторы.
Штаммы бактерий
Трансформация клеток . i плазмидной ДНК
Трансформация клеток i с использованием СаС1г.
Трансформация клеток . i электропорацией.
Выделение плазмидной ДНК.
Определение первичной последовательности ДНК.
Выделение тотальной РНК
Выделение хромосомной ДНК и приготовление образцов хромосомной
ДНК для Саузернбдотгибридизационного анализа.
Выделение фаговой ДНК
Нозерн и Саузерн 6лот гибридизанионный анализ
Электрофорез и перенос образцов РНК на мембрану
Электрофорез II перенос образцов ДНК на мембрану.
Приготовление меченых ДНКзонлов.
Гибридизация.
Приготовление бактериальных штаммов, определение титра и
амплификация библиотеки
Скрининг библиотеки
Получение поликлопальной антисыворотки к белку
Культивирование трансформированных клеточных линий и первичных
культур
Получение кондиционной среды.
Выделение нейтрофилов и лимфоцитов человека
Получение содержимого фанул нейтрофилов
Иммужн истохимический анализ.
Электрофорез вДСНПААГ.
Электроперенос белков на мембрану
Вестерн блат анализ.
Разрушение эукариотических клеток ультразвуком.
Фракционирование клеточных мембран.
Результаты и обсуждения
Клонирование полноразмерной кДНК гена .
Анализ клонированных сплайсвариантов гена
Изучение экспрессии гена . в нормальных тканях мыши
Мышиный ген имеет своею человеческого гомолога
Изучение геномной организации юна .
Полная нуклеотидная последовательность мышиного юна
Гены и 7 человека локализованы на хромосоме.
Получение рекомби наш лого белка и антител к нему.
Локализация белка в клетках линии ВНК.
Влияние различных агентов на секрецию белка в клетках иммунной системы мыши и человека.
Сравнительный анализ экспрессии белка под действием ФГА в лимфоцитах человека и линии человеческой Гклеточной лимфомы
.
Иммуногистохимичсский анализ экспрессии белка в органах
Выводы
Список литературы


Оглавление. Врожденный иммунитет. Группы пагтсрнраспознающнх клеточных рецепторов . Интсфины. Рецептор комплемента 3 3. Лейцинбогатые белки. Семейство II. Гра м м отри иател ьн ые ба ктери и. Граммположительные бактерии. Заключение. Материалы и методы. Амплификация фрагмента кДНК . Амплификация 5 копия кДМК гена . Амплификация 3 конца кДНК гена . Плазмндные и фаговые векторы. Трансформация клеток . Трансформация клеток i с использованием СаС1г. Трансформация клеток . Выделение плазмидной ДНК. Определение первичной последовательности ДНК. ДНК для Саузернбдотгибридизационного анализа. Электрофорез II перенос образцов ДНК на мембрану. Приготовление меченых ДНКзонлов. Гибридизация. Получение кондиционной среды. Иммужн истохимический анализ. Электрофорез вДСНПААГ. Вестерн блат анализ. Разрушение эукариотических клеток ультразвуком. Фракционирование клеточных мембран. Клонирование полноразмерной кДНК гена . Изучение экспрессии гена . Изучение геномной организации юна . Гены и 7 человека локализованы на хромосоме. Получение рекомби наш лого белка и антител к нему. Локализация белка в клетках линии ВНК. Влияние различных агентов на секрецию белка в клетках иммунной системы мыши и человека. . Список литературы. Список сокращений. ДАБ 3. ПАМП патогенассоииированный молекулярный паттерн. Введение. Иммунитет эго способ зашиты организма от всех аитигенпо чужеродных веществ как экзогенной, так и эндогенной природы. Подобная зашита обеспечивает генетическую стабильность особей в течении их жизни. Иммунитет любого позвоночного организма складывается из взаимодействия двух различных систем врожденною и приобретенного иммунитета. Врожденный иммунитет включает в себя систему прсдсущсствуюших. Долгое время врожденный иммунитет считался вторичным по важности в иерархии иммунного ответа и рассматривался как часть приобретенного. Но в последние несколько лет интерес к врожденному иммунитету возрос, так как было показано, что его механизмы способны инициировать и модулировать специфический иммунный ответ. Обзор литературы. Врожденный иммунитет. Вовторых.