Иммунобиологические свойства рекомбинантного антигена ESAT-6 Mycobacterium tuberculosis

• Автор: Носарева, Олеся Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 149 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список принятых сокращений

Введение

Научнопрактическая значимость работы.

Положения, выносимые на защиту.

Структура диссертации

Апробация работы и публикации

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Эпидемиология туберкулеза.

1.2. Особенности противотуберкулзного иммунитета

1.2.1. Врожднный иммунитет

1.2.2.Приобретнный иммунитет
1.2.2.1. Клеточный иммунитет.
1.2.2.2. Гуморальный иммунитет.
1.3. Диагностика туберкулза.
1.4. Вакцинопрофилактика туберкулза.
1.4.1. Вакцина .
1.4.2. Новые вакцины.
1.4.3. Системы доставки для рекомбинантных белков и ДНКвакцин
1.5. Роль изучения генома в борьбе против туберкулза
1.5.1. Область I.
1.5.2. Антигены 6 и .
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы.
2.2. Методы
2.2.1. Молекулярнобиологические методы
2.2.2. Иммунологические методы.
2.2.3. Статистическая обработка полученных результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Получение и исследование свойств гибридного белка 6.
3.1.1. Получение гибридного белка ОБТЕБАТб
3.1.2. Анализ антигенных свойств гибридного белка вБТБЭЛТб
3.1.2.1. Использование гибридного белка ОБТЕБАТб в ИФА
3.1.2.2. Использование гибридного белка ОБТЕБАТб в ЕЫ8АИФНу.
3.2. Получение и исследование иммуногенных свойств препарата КрОЫЕб на основе рекомбинантной ДНК, кодирующей микобактериальный антиген ЕБАТб, и полисахаридного конъюгата.
3.2.1. Клонирование последовательности ДНК, содержащей ген ехА
3.2.2. Оценка полисахаридного конъюгата в качестве системы доставки на примере МБЧ.
3.2.3. Получение препаратов КрОЫЕб и КрсБЫА
3.2.4. Оценка степени защиты ДНК в составе экспериментального препарата при воздействии нуклеаз
3.2.5. Схема проведения эксперимента.
3.2.6. Оценка острой токсичности экспериментальных препаратов
3.2.7. Оценка гематологических показателей лабораторных мышей
3.2.8. Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови иммунизированных животных
3.2.9. Индукция гуморального иммунного ответа иммунизированных мышей на антиген ЕБАТб
3.2 Индукция клеточного иммунного ответа иммунизированных мышей
на антиген ЕБАТ6
Заключение
Список публикаций
Список используемой литературы


Оценить безопасность применения экспериментального препарата для живых организмов. Впервые получен рекомбинантный штамм Е. 6, который оказался пригоден для диагностики активного ТБ. Важным результатом выполненной работы явилось определение чувствительности ИФА при выявлении антител класса I к антигену 6 М i, которая составила , при специфичности . В результате проделанной работы впервые был показан протективный иммунный ответ при заражении М. Впервые сконструирована плазмида рОМЕб, содержащая ген x, экспрессирующий микобактериальный антиген 6, на основе которой создан экспериментальный препарат 6, окруженный полисахаридной оболочкой из молекул модифицированного полиглюкина и спермидина, способной защищать нуклеотидный материал от деградации нуклеазами. Впервые показано, что иммунизация экспериментальным препаратом КрОЫЕб лабораторных животных приводит к формированию специфического клеточного иммунного ответа, а сам препарат не обладает острой токсичностью и является безопасным для применения на животных. Полученные данные настоящей работы по иммуногенности экспериментального препарата могут лечь в основу дальнейшего исследования его протективных свойств на лабораторных животных. Плаз. М. 6 в клетках Е. Использование рекомбинантного белка 6 в ИФА позволяет выявлять антитела, специфичные кМ i. Использование рекомбинантного белка 6 в IИФНу анализе позволяет проводить дифференциальную диагностику активного туберкулза и поствакцинального иммунитета. Искусственные микобактериальные частицы на основе полисахаридного конъюгата и экспонирующие на своей поверхности суммарные белки М vi обладают иммуногенностью и протективными свойствами на экспериментальной модели животных. Экспериментальный препарат на основе рекомбинантной ДНК, кодирующей антиген 6, и полисахаридной системы доставки обладает Тклеточной иммуногенностью на мышиной модели и безопасен для животных. Диссертация изложена на 9 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы Материалы и методы, главы Результаты и обсуждение, заключения, выводов и списка литературы. Библиография включает 5 работ отечественных авторов и 8 зарубежных. Работа иллюстрирована рисунками и включает 6 таблиц. Баден, Австрия, , РоссийскоГерманской конференции Форума Коха Мечникова Томск, Россия, . Настоящая работа была выполнена в лаборатории разработки новых методов диагностики заболеваний человека ФГУН ГНЦ ВБ Вектор эксперименты по клонированию, получению и исследованию рекомбинантных белков, получению экспериментальных препаратов для иммунизации животных и исследованию их иммуногенных и токсических свойств на базе ГНУ Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН эксперименты по заражению М. По материалам диссертации было опубликовано четыре статьи, 3 из них в журналах, рекомендованных ВАК для кандидатских диссертаций. Выражаю глубокую благодарность за неоценимую помощь и поддержку в планировании и проведении экспериментов, обсуждении полученных результатов и подготовке диссертации Андрею Егоровичу Нестерову. Искренне признательна профессору Георгию Михайловичу Игнатьеву за ценные советы в подготовке экспериментов, терпение и помощь в осмыслении результатов. Благодарна всем сотрудникам лаборатории разработки новых методов диагностики заболеваний человека ФГУН ГНЦ ВБ Вектор А. Н. Болдыреву, к. О.Ю. Смирновой, к. А.П. Агафонову, к. М.Ш. Азаеву, к. Ю.В. Туманову и к. А.Н. Донченко за удачное совместное проведение экспериментов. Особую благодарность выражаю своему научному руководителю к. Сергею Ивановичу Татькову за поддержку, участие в обсуждении результатов и предоставленную свободу действий для совместного выполнения части экспериментов с нашими коллегами ФГУН ГНЦ ВБ Вектор. Благодарю моих родителей, брата и моих друзей, оказывавших мне всестороннюю поддержку, как при проведении экспериментов, так и при написании диссертации.