Динитрозильные комплексы железа, S-нитрозотиолы и коэнзим Q как антиоксиданты в системах, моделирующих окислительный стресс

• Автор: Губкин, Андрей Александрович
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил.

Введение.

Глава 1. Литературный обзор.

1.1. Физикохимические свойства активных форм

кислорода и азота

1.1.1. Активные формы азота.

1.1.2. Активные формы кислорода

1.2. Источники активных форм кислорода и азота в биологических системах.

1.2.1. Ос интазы

1.2.2. Образование активных форм кислорода митохондриями

1.2.3. Ксантиноксидоредуктаза

1.3. Взаимодействие активных форм кислорода и азота.

1.3.1. Активные формы азота в клетке.
1.3.2. Пероксинитрит.
1.4. Прооксидангиые и антиоксидангные свойства активных форм кислорода и азота
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Регистрация спектров ЭПР
2.2. Получение препаратов
2.3. Получение изолированных митохондрий.
2.4. Индуцирование перикисного окисления митохондрий.
Метод определения МДА.
2.5. Экстракция коэизимов СЬ и 3ю из биологических образцов Глава 3. Взаимодействие низкомолекулярных динитрозильных комплексов с
активными формами кислорода и гидропероксидами
Глава 4. Ферритин и миоглобин как индукторы перекисного окисления.
Глава 5. Деструкция белковых динитрозильных комплексов активными формами кислорода
5.1. Взаимодействие альбуминовых и гемоглобиновых ДНКЖ с супероксидом
5.2. Взаимодействие альбуминовых и гемоглобиновых ДНКЖ с пероксидом водорода и гидропероксидом третбутила.
5.3. Антиоксидантное действие ДНКЖ
5.4. Взаимодействие альбуминовых и гемоглобиновых ДНКЖ с иероксинитритом
Глава 6. Взаимодействие оксофферилмиоглобина с ДНКЖ
Глава 7. Взаимодействие убихинола и СБМО в условиях моделирующих окислительный стресс.
7.1. Защитное действие ОБМ при деструкции убихинона
в ходе перекисного окисления гомогената миокарда крыс
7.2. Влияние убихинола на антиоксидантное действие СБЫС
Заключение
Выводы.
Библиографический список.
Условные обозначения и сокращения
АФК активные формы кислорода
БСА бычий сывороточный альбумин
ДНКЖ 1 динитрозильные комплексы железа
ДТПА диэтилентриаминопентауксусная кислота
МДА малоновый диальдегид
ПОЛ перекисное оксисление липидов
СОД супероксидцисмутаза
ТБК 2тиобарбитуровая кислота
ЭПР электронный парамагнитный резонанс
ЭФР эндотелиальный фактор релоксации сосудов
5диэтоксифосфорил5метил1пироллинМоксид
этилендиаминтетрауксусная кислота
восстановленный глутатион
нитрозоглутатион
Н2гидроксиэтилпиперазинЫ2этансульфоновая кислота синтаза оксида азота
I 4,5 диоксибензол 1,3 дисульфат натрия
Введение


Исследовать особенности реакций ассоциированных с гемоглобином и альбумином динитрозильных комплексов с активными формами кислорода и пероксинитритом. В системах, моделирующих окислительный стресс, исследовать влияние динитрозильных комплексов железа и 8нитрозоглутатиопа на характеристики индуцированного железосодержащими белками перекисного окисления препаратов миокарда. С и 8нитрозоглутатиона. I лава 1. Литературный обзор. Понятие радикалы появилось в науке давно, примерно во второй половине го века. Доказать их существование не удавалось вплоть до начала го века. В году Мозес Гомберг впервые получил трифенилметильные радикалы 1. Пожалуй только на поиски философского камня было потрачено больше времени. Это не случайно, не связано с отсутствием интереса к их поискам или ошибками в теоретических представлениях. Дело в высокой реакционной способности и малом времени жизни этого класса веществ. Эти качества существенно усложняют работу с ними и повышают значение планирования эксперимента и требования к используемым методикам. В конце го века Антуан Лавуазье впервые открыл роль кислорода в процессах окисления, горения и дыхания. Это стало началом зарождения свободнорадикальной биологии. Позднее, в году другой француз, ЛуисЖакоб Тенард, впервые описал перекись водорода и наблюдал ее разложение в присутствии живых тканей, с выделением кислорода. В году Фентон открыл свою, знаменитую теперь, реакцию. Упоминание о ней встречается в значительной части работ, посвященных изучению свободных радикалов в биологии. Позднее Фриц Габер и Йозеф Вейс дали объяснение высокой реакционной способности реактива Фентона, доказав образование в ней гидроксильных радикалов. Самыми известными и, возможно, наиболее изученными свободными радикалами в биологии являются активные формы кислорода АФК. Первыми были открыты их наиболее очевидные цитотоксические и деструктивные свойства. В х годах Б. Н. Тарусовым и позднее его учениками было описано развитие цепных процессов перекисного окисления липидов ПОЛ 2, 3. Эти процессы происходят во всех тканях аэробных организмов преимущественно в мембранах и других белоклигшдных структурах. Продуктами ПОЛ являются липогидропероксиды, диальдегиды малоновый диальдегид и др. Накопление продуктов ПОЛ приводит к изменениям в физикохимических свойствах биологических мембран и нарушению работы макромолекулярных комплексов цитоплазмы клетки. Следовательно для поддержания структурного гомеостаза требуются механизмы обновления биомембран и антиоксидантные системы. Понятие антиоксидант не имеет строгого определения и включает в себя большое количество веществ различной химической природы убихинон, токоферолы, каротиноиды, аскорбат, полифенолы, флавоноиды, соединения содержащие тиольную группу 1, стероидные гормоны и многие другие. Важнейшим фактором защиты биологических систем от АФК являются также антиоксидантные ферменты, в том числе супероксиддисмутаза СОД, каталаза, глутатионпероксидаза и глутатионБтрансфераза. До недавнего времени рассматривались исключительно патогенные свойства АФК, соответственным было и отношение к антиоксидантам. Представления о них, подчас не совсем корректные, распространились далеко за пределы науки. Однако сегодня наши знания о свободных радикалах в биологии, в том числе АФК, существенно расширились, поэтому роль антиоксидантов в клетке тоже подверглась пересмотру. Уже нельзя однозначно утверждать что АФК вредные, исключительно токсичные для клетки молекулы, побочный продукт метаболических путей и, как следствие, чем эффективней работа антиоксидантной системы, тем лучше. Под сомнением оказались положительные эффекты от приема антиоксидантньтх витаминов и каротина . Особенно большое количество работ посвященное изучению активных форм кислорода вышло в последнее десятилетие. До середины х годов АФК и большинство других свободных радикалов рассматривались в биологии исключительно как цитотаксичиые, деструктивные молекулы. Их высокая активность и наличие в клетке сложных антиоксидантньтх систем как бы подтверждало эту точку зрения. Однако со временем отношение изменилось.