Регуляция транспорта митохондрий в клетках млекопитающих

• Автор: Кулик, Александр Валентинович
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 82 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИИ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распределение и функции митохондрий в клетке.

1.2. Цитоскелет, как средство внутриклеточного транспорта

1.2.1. Особенности системы микротрубочек.

1.2.2. Особенности актинового цитоскелета

1.2.2.1. Полимеризация новых актиновых микрофиламснтов. Аф23комплекс.

1.2.2.2. Роль белков форминового семейства в организации актинового цитоскелета.

1.2.3. Регуляция внутриклеточной организации микротрубочек и актинового цитоскелета

1.2.4. Участие двух цитоскелетных систем в транспорте митохондрий
1.3. Молекулярные моторы, участвующие в движении митохондрий
1.4. Регуляция распределения митохондрий как процесс переключения между стационарным и подвижным состояниями.
1.5. Видеомикроскопические подходы к наблюдению митохондрий в живых клетках
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Культивирование клеток
2.2. Флуоресцентная микроскопия
2.2.1. Фиксация клеток
2.2.2. Процедура иммунофлуоресцентного окрашивания
2.2.3. Антитела, используемые в работе
2.2.4. Окрашивание актина
2.3. ДНК конструкции
2.4. Трансфекция клеток.
2.5. Микроинъекция
2.5.1. Микроинъекция кДНК
2.5.2. Микроинъекция белка.
2.6. Получение видеомикроскопических данных.
2.7. Обработка данных.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Наблюдение митохондрий в живых клетках.
3.2. Определение подвижности митохондрий клетках
3.3. Подвижность митохондрий находится под контролем внешних факторов
3.4. Лизофосфатидная кислота ингибирует подвижность митохондрий через белок А.
3.5. Белок регулирует распределение митохондрий, действуя через свои белкимишени.
3.5.1. Изменение активности киназы не влияет на подвижность митохондрий
3.5.2. Белок i играет ключевую роль в регуляции транспорта митохондрий.
3.6. Роль актина в ингибировании движения митохондрий
3.7. Полимеризация актина, стимулируемая независимыми от i способами, не снижает подвижность митохондрий.
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Глава 1. Распределение и функции митохондрий в клетке. Особенности системы микротрубочек. Полимеризация новых актиновых микрофиламснтов. Аф23комплекс. Роль белков форминового семейства в организации актинового цитоскелета. Регуляция распределения митохондрий как процесс переключения между стационарным и подвижным состояниями. Глава 2. Трансфекция клеток. Микроинъекция белка. Получение видеомикроскопических данных. Обработка данных. Глава 3. Наблюдение митохондрий в живых клетках. Лизофосфатидная кислота ингибирует подвижность митохондрий через белок А. Белок регулирует распределение митохондрий, действуя через свои белкимишени. Белок i играет ключевую роль в регуляции транспорта митохондрий. Полимеризация актина, стимулируемая независимыми от i способами, не снижает подвижность митохондрий. Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. ЭГТА этиленгликольбисраминоэтилЫ,Ытетрауксуная кислота ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота. ВВЕДЕНИЕ. Митохондрии играют важнейшую роль в физиологии клетки. Они обеспечивают клетку энергией в форме молекул АТФ, участвуют в регуляции концентрации ионов кальция в цитоплазме, а также являются важнейшим звеном в процессе программируемой клеточной гибели. Локализация митохондрий находится под контролем внешних и внутренних факторов и достигается при помощи транспорта этих органелл вдоль микротрубочек и актиновых филаментов моторными белками. Чтобы работа различных моторных белков в клетках была скоординирована, необходимо наличие четкой системы их регуляции. Регуляция распределения митохондрий может происходить как на стадии собственно транспорта, в результате изменения активности моторных белков и организации микротрубочек и актиновых филаментов, так и при посредством регуляции взаимодействий митохондрий с неподвижными цитоскелетными структурами. В отличие от других органелл, митохондрии большую часть времени проводят в неподвижном состоянии. Вопрос о том, какие именно белки участвуют в непосредственном удерживании митохондрий в неподвижном состоянии, в настоящее время остается открытым. Накапливается все больше данных, свидетельствующих о наличии стационарных взаимодействий между митохондриями и элементами цитоскелета. Тем не менее, сигнальные пути, лежащие в основе регуляции переключения между стационарным и подвижным состоянием митохондрий, еще не определены. Мы обнаружили, что в клетках СУ1 митохондрии переходят из подвижного состояния в стационарное в ответ на добавление одного из основных факторов роста, лизофосфатидной кислоты ЬРА. Целью настоящей работы было установить механизмы передачи сигнала ЬРА, контролирующего подвижность митохондрий, и определить участников этой передачи. Мы показали, что за подвижность митохондрий отвечает регуляторный сигнальный каскад, включающий белок ШюА и активируемый им белок тОшЬ ЬРА, связываясь с клеточными рецепторами, стимулирует активацию малой ГТФазы ЮюА, которая затем активирует белок пЮ1а1, относящийся к семейству форминов. Активный белок ша1 стимулирует полимеризацию актина, и образующиеся структуры актинового цитоскелета взаимодействуют с митохондриями, которые в результате переходят в стационарное состояние.