Гибель лимфоидных клеток при воздействии окислительного стресса и генотоксических агентов

• Автор: Коноплянников, Михаил Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Гл. 1. Обзор литературы

1.1. Основные механизмы гибели клеток под

действием различных химических и физических факторов

1.2. Активные формы кислорода и их роль в развитии

апоптоза

1.3. Особенности клеточной гибели лимфоидных клеток

1.4. Методы регистрации клеточной гибели

Гл.2. Материалы и методы

Гл. 3. Результаты и обсуждение

3.1. ДНКкометы как маркер клеточной гибели
3.2. Гибель мышиных лимфобластных клеток Р8 под действием окислительного стресса, вызываемого менадионом
3.3. Гибель мышиных лимфобластных клеток Р8 под действием оксида азота, индуцируемого нитропруссидом натрия
3.4. Гибель мышиных лимфобластных клеток Р8 под
действием фотодинамической терапии
3.5. Механизмы радиационной гибели лимфоцитов периферической крови человека
3.6. Клеточная гибель лимфоцитов периферической крови
человека под действием этопозида
Заключение
Выводы
Список литературы


При сравнительном изучении эффекта воздействия на лимфоциты периферической крови человека этопозида, не являющегося индуктором окислительного стресса, но обладающего генотоксическим действием, было обнаружено, что в исследуемых концентрациях 0 мкгмл инкубация клеток с препаратом в течение 3 или ч индуцировала апоптоз. В отличие от индукторов окислительного стресса, при воздействии этопозида уровень апоптотической гибели мало зависел от концентрации препарата и длительности инкубации клеток. Таким образом, сопоставление на клеточном уровне эффектов чистых индукторов окислительного стресса и агентов, повреждающее действие которых частично или полностью не связано с продукцией АФК, позволяет заключить, что для первых характерно появление обеих форм клеточной гибели апоптоза и некроза, выраженность которых в значительной мере определяется дозой агента и продолжительностью действия обычно мягкий окислительный стресс приводит по преимуществу к апоптозу, а жесткий стресс к некрозу, в то время как для второго типа изученных агентов форма клеточной гибели и ее выраженность больше определяются спецификой действия агента, а не его дозой. Полученные в данной работе результаты могут иметь и практическое значение при планировании использования исследованных или подобных по механизму воздействия агентов при лучевом, химиотерапевтическом, фотодинамическом или комбинированном лечении онкологических больных, когда стоит противоречивая задача усиления повреждения опухолевых клеток и ослабления в то же время повреждения клеток нормальных тканей. Так, данные об индукции массового апоптоза опухолевых клеток с последующим их лизисом при проведении фотодинамического воздействия обосновывает использование этого способа лечения злокачественных новообразований, если удается достичь различия в степени удержания фотосенсибилизатора между нормальными и опухолевыми клетками. Данные по способности малых доз менадиона усиливать повреждающее действие на клетки оксида азота продуцируемого при введении нитропруссида натрия позволяют рекомендовать применение этих двух уже известных радиосенсибилизаторов совместно при проведении лучевого или комбинированного лечения резистентных форм злокачественных новообразований. Важное значение для дальнейших исследований в области лечения больных системной красной волчанкой может иметь описанный в нашей работе феномен повышенной спонтанной апоптотической гибели лимфоцитов периферической крови, выявляемый методом ДНКкомет. Вообще, метод ДНКкомет несомненно является высокоперспективным для выявления в различных клеточных популяциях клеток, имеющих повреждения генетического аппарата, приводящие их к последующей гибели. ГЛАВА 1. Основные механизмы гибели клеток под действием различных химических и физических факторов. При воздействии на клетку экстремальных факторов достаточной мощности, таких как различного рода химические вещества, тепловые воздействия и радиация, в ней развиваются некротические процессы. Это происходит, прежде всего, в результате нарушения проницаемости мембран, что обусловлено повреждением их структуры и нарушением работы катионного насоса. При этом снижается концентрация АТФ и величина внутриклеточного , что вызывает перестройки хроматина и угнетение процессов биосинтеза РНК. Необратимой стадией клеточного некроза является значительное набухание митохондрий, обусловленное перераспределением катионов и распадом фосфолипидов. Происходит фрагментация цитоплазматических и митохондриальных мембран, распад хроматина под действием нуклеаз. Высвобождающиеся из лизосом гидролазы приводят к полной деструкции клетки 4. Апоптоз, в отличие от некроза, является результатом вредных, но недостаточно сильных воздействий, не вызывающих коагуляционные изменения в клетке 5. Апоптоз характеризуется определенными морфологическими и биохимическими особенностями. На завершающей стадии развития собственно апоптоза клетка распадается с образованием так называемых апоптотических тел. Этому предшествует маргинализация и конденсация ядерного хроматина, уплотнение цитоплазмы с последующим сморщиванием клеток, образование вздутий на плазматической мембране, фрагментация ядра.