Исследование пролиферативных и дифференцировочных свойств клеток секреторного эпителия ядовитой железы гадюки обыкновенной (Vipera berus) в условиях in vitro

• Автор: Голубков, Владислав Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 111 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гадюка обыкновенная Vi в природе

2. Свойства яда гадюки обыкновенной

2.1. Яд змей семейства Vii

2.1.1. Ферменты яда

2.1.2. Токсины полипептидной природы

2.1.3. Дезинтегрины

2.2. Особенности яда V

3. Строение и функция ядовитых желез змей семейства Vii

3.1. Анатомическое строение ядовитого аппарата

и гистологическое строение ядовитой железы
3.3. Ультраструктура клеток секреторного эпителия
3.4. Секреторный цикл
3.5. Регуляция синтеза и секреции яда
4. Слюнная железа млекопитающих орган, гомологичный ядовитым
железам змей
4.1. Строение околоушной слюнной железы млекопитающих
4.2. Регуляция синтеза и секреции ферментов
4.3. Пролиферация клеток слюнных желез
5. Клетки секреторного эпителия в условиях i vi
5.1. Получение первичной культуры и иммортализованной линии клеток секреторного эпителия. Пролиферация и дифференцировка секреторных
клеток i vi
5.2. Роль взаимодействий клетки с внеклеточным матриксом и межклеточных контактов в поляризации и дифференцировке клеток эпителия
5.3. Резистентность клеток к токсичным веществам
5.4. Клетки ядовитой железы змей в условиях i vi ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
6. Материалы и методы
6.1. Выделение ядовитой железы, получение и инкубирование живых срезов железы V.
6.2. Получение первичной культуры и длительное культивирование
клеток секреторного эпителия ядовитой железы V.
6.2.1. Выделение клеток секреторного эпителия
6.2.2. Исследование влияния белков внеклеточного матрикса на адгезию и распластывание клеток секреторного эпителия ядовитой железы
6.3. Исследование синтеза и секреции белков яда в клетках секреторного эпителия ядовитой железы V в условиях i vi
6.3.1. Индукцкя синтеза и секреции белков яда в срезах железы
6.3.2. Индукция синтеза и секреции белков яда в распластанных клетках и выявление белков яда иммунологическими методами
6.4. Методы оценки жизнеспособности клеток секреторного эпителия ядовитой железы V. в условиях i vi
6.4.1. Гметалогический анализ и электронная микроскопия
6.4.2. Определение проницаемости мембраны по окраске ядерными
красителями
6.5. Определение токсичности цельного яда V. на клетки млекопитающих и на клетки секреторного эпителия ядовитой железы V i vi.
6.6. Выявление синтеза ДНК и пролиферации клеток
7. Результаты исследований
7.1. Получение переживающих срезов ядовитой железы и исследование секреции белков яда i vi
7.2 Выделение клеток секреторного эпителия ядовитой железы V. и получение первичной культуры
7.3. Сравнительный анализ морфологии клеток секреторного эпителия
ядовитой железы V. в условиях первичной культуры и i viv.
Функциональные свойства секреторных клеток первичной культуры. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Яд некоторых видов змей обладает ценными качествами и находит широкое применение в медицине и биологических исследованиях. Змеиные яды являются уникальной по химическому составу и физиологическому действию группой биологически активных соединений. Яд змей используется в производстве традиционных средств, применяемых при заболеваниях опорнодвигательного аппарата випратокс, випраксин, випралгин и др. Продолжаются исследования по использованию яда змей при лечении злокачественных новообразований. Возрастают масштабы промышленного производства на базе яда гадюк лекарственных препаратов, применяемых при нарушениях свертывающей системы крови лебетокс, стипвен, анкрод, арвин и др Использование ядов змей в лабораторной практике позволяет диагностировать сложные нарушения кровосвертывания гемофиия и психики шизофрения и др. Некотрые компоненты змеиных ядов применяются в экспериментальной биологии. Исследования свойств змеиных ядов приводят к открытиям все новых и новых перспектив их применения. До недавнего прошлого необходимое для удовлетворения потребностей фармацевтической промышленности количество змей относительно легко отлавливалось в природе. Для получения яда организованы серпентарии, где эксплуатируют отловленных змей. Условия, в которых они содержатся и чаше всего не кормятся, сокращают срок жизни змей в серпентариях до полугола. Например, катастрофическое снижение численности ядовитых змей преимущественно гюрзы в Марыйской области послужило причиной прекращения деятельности Бадхызского серпентария. На промысловой территории Калининского серпентария общая численность гюрзы за пять сезонов отлова снизилась почти в раз. Отлов змей производится в местах с наибольшей их плотностью, что приводит к повышению нагрузки на естественные популяции змей. Нормы отлова практически не контролируются 9. Во многих серпентариях содержание змей остается на очень низком уровне, что напрямую сказывается на ядопродухтивности змей . После кратного ядовзятия количество яда постепенно уменьшается, после в составе яда появляется кровь и гной. Создавшееся противоречие между потребностью фармацевтической промышленности в змеином яде и возможностями серпентариев угрожает и производству ядов для изготовления лекарственных препаратов, и сохранности ядовитых змей. Особенно остро этот вопрос звучит, если учесть, что разработка новых препаратов на базе змеиных ядов может в ближайшее время привести к повышению потребности в них в несколько раз по сравнению с настоящей 3. При удовлетворительном содержании змей, индивидуальный разовый выход сухого яда у порзы с момента приема и до конца эксплуатационного срока мес. Выход сухого яда в I год эксплуатации был равен мг, 2 год мг, т. Развитие технологии получения змеиного яда привело к развитию исследований строения и функции ядовитого аппарата змей. Были проведены морфологические исследования ядовитых желез на гистологическом и ультраструктурном уровнях, изучены некоторые аспекты синтеза и секреции белков яда 4, , 3, , 6, 0. Было обнаружено, что яд в железах секретируется не непрерывно. Секреторные клетки обладают выраженным секреторным циклом, который инициируется после укуса или искусственного взятия яда у змеи и сопровождается изменениями биохимии яда, морфологии, синтетической и секреторной активности клеток железы. Был поставлен вопрос об участии . Выдвигалась теория об автономной регуляции секреции яда в железе без участия нервного обеспечения. Подтверждением этой теории служат данные о продолжающейся секреции яда после денервации железы , секреции белков яда в срезах железы 6 и даже отдельно культивируемыми клетками 2 без стимуляции со стороны нервной системы. С другой стороны, есть данные о регуляции секреции яда нервной системой. Мхолинорецепторов . Этому свидетельствуют результаты исследований молекулярных механизмов физиологии слюнной железы, полученные на иммортализованных линиях клеток слюнной железы мыши, крысы и человека, позволившие существенно расширить представление о физиологии этого органа , , , 7, 1, 6, , 3.