Исследование биофизических механизмов противоязвенного действия хондроитинсульфата

• Автор: Трапков, Владимир Александрович
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Купавна
• Количество страниц: 161 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ХАРАКТЕРИСТИКА СВОЙСТВ ХОКДРОИТИНСУЛЬШАТА

Химический состав, структура и физикохимические свойства хондроитинсульфата

Взаимодействие хондроитинсульфата с биологически активными веществами

Биологическая доступность и фармакологическое использование хондроитинсульфата

СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМАХ ПАТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ПРОТЕОЛИТКЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ И ГИСТАМИНА ПРИ ФОРМИРОВАНИИ ЯЗВЕННОГО ПРОЦЕССА В ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ СТЕНКЕ. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СУЛЬМТЙРОВАННЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ В

КАЧЕСТВЕ АНТИУЛЬЦЕРОГЕННЫХ ВЕЩЕСТВ.

Протеолитичеекие ферменты гастродуоденальной системы

как агрессивные факторы при ульцерогенезе .

Механизмы патогенетического действия гистамина при
ульцерогенезе .
Противоязвенное действие сульфатированных полисахаридов растительного происхождения и искусственных сульфатированных полисахаридов
Глава II. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И МЕТОДЫ ИХ ИЗУЧЕНИЯ .
Материалы.
Идентификация препаратов хондроитинсульфата .
Определение концентрации хондроитинсульфата .
Применение метода микрокалориметрии для изучения мой .
лекулярных реакций .
принцип работы проточного микрокалориметра
Стр.
определение термодинамических параметров комплексообразования малых молекул с биополимерами методом микрокалориметрии .
использование метода проточной микрокалориметрии для изучения ферментативных реакций .
Оценка взаимодействия низко и высокомолекулярных биологически активных соединений с хондроитинсульфатом методом измерения интенсивности метахроматической
реакции
Статистическая обработка результатов
Глава III. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОЯЗВЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ХОНДРОИТИНСУЛЬФАТА НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЯХ УЛЬЦЕРОГЕНЕЗА .
Методики моделей ульцерогенеза в гастродуоденальной
области
гистаминовая язва желудка у морских свинок
цистеаминовая язва двенадцатиперстной кишки у крыс
Результаты и обсуждение .
Глава 1У. ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ ХОНДРОЙТИНСУЛЬМТА НА ПР0ТЕ
ЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПЕПСИНА
Методики проведенных измерений.
определение протеолитической активности пепсина .
спектрофотометрические измерения в видимой области
Результаты
Обсуждение
Глава У. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ХОНДРОИТИНСУЛЬФАТА НА ФЕРМЕНТАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ ТРИПСИНА.
Методики проведенных измерений
определение эстеразной активности трипсина
определение протеолитической активности трипсина I
микрокалориметрическим методом.
Стр.
спектрофотометрическое определение взаимодействия трипсина с хондроитинеульфатом в УФ и видимой
области
Результаты.
Обсуждение
Глава У1. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ГИСТАМИНА С ХОНДРОИТИН
СУЛЬФАТОМ
Методики проведенных измерений
микрокалориметрические измерения
спектрофотометрические измерения в видимой области 8 определение стимулированной введением гистамина секреции соляной кислоты изолированным желудком
мыши рНметрическим методом.
Результаты III
Обсуждение
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЕГАТОВ
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Фракционирование препарата хондроитин4сульфата, полученного путем экстракции щелочью из хряща носовой перегородки быка, методом гельфильтрации, обнаружило разброс мо
лекулярных масс отдельных молекул от 8,2 до ,9 дальтон II. Величины среднечисленной молекулярной массы хондроитинсульфатов, определенные различными физическими и химическими методами, находятся в диапазоне ,6,0 дальтон . Величина средневесовой молекулярной массы хондроитин4сульфата, по данным Уостесона, равна ,3 дальтон . Изомеры хондроитинсульфата являются сильными полиэлектролитами. При физиологических значениях плотность отрицательных зарядов в молекулах хондроитинсульфатов высока ввиду присутствия в полисахаридных цепях значительного количества карбоксильных групп остатков глюкуроновой кислоты и сульфат
ных групп остатков Лацетилгалактозамина. Величины рК карбоксильных групп, определенные методом потенциометрического титрования, составляют 3, и 3, для хондроитин4 и хондроитин6сульфатов, соответственно . Несколько отличное значение рК, равное 3,, было получено Парком и Чакрабарти для смеси изомеров хондроитинсульфатов при изучении изменения спектров кругового дихроизма растворов сульфатированного гликозаминогликана в зависимости от среды . Особенности первичной структуры изомеров хондроитинсульфата определяют такие важные свойства гликозаминогликанов как конформацию биополимера в растворе, взаимодействие с низкомолекулярными и высокомолекулярными биологическими соединениями 6. Для изучения пространственной формы гликозаминогликанов в последнее десятилетие стал интенсивно применяться метод рентгеноструктурного анализа, что связано с разработкой способов получения ориентированных пленок и волокон полисахаридов животного происхождения. Многочисленные исследования, проведенные с помощью этого метода, указывают на то, что все гликозаминогликаны в твердом состоянии образуют упорядоченные структуры спирали ,. Определение молекулярной конформации гликозаминогликанов осуществляется путем оптимизации соответствия расчетных интенсивностей для моделей различных спиралей наблюдаемым в эксперименте интенсивностям. Несмотря на то, что вид рентгенограмм в значительной степени зависит от влажности, при которой происходит съемка, и от вида противоиона, для различных образцов хондроитин4сульфата сохраняется периодичность вдоль оси шаг спирали, равная 2,2, нм . Анализ картин дифракции показывает, что в тригональную элементарную ячейку с параметрами а в 1,1, нм, С 2,2, нм и про
странственной симметрией Р входит две молекулы полимера ,. Конформация левой спирали 3 полианиона стабилизирована внутримолекулярной водородной связью, локализованной в областкЗ гликозидной связи, и двумя межмолекулярными водородными связями на повторяющуюся дисахаридную единицу. Ввиду того, что катионы натрия удалены, по крайней мере, на 0,3 нм от атомов кислорода сульфатных и карбоксильных групп, предполагается, что противоионы полностью гидратированы и полианион окружен жестко координированной гидратной оболочкой до молекул воды на дисахаридное звено, также образующей спиральную структуру завивающуюся параллельно спирали полианиона . Оценка степени связывания воды с хондроитинсульфатами, проведенная методом дифференциальной сканирующей калориметрии, показала, что молекулы полианионов находятся в высокогидратированном состоянии и содержат молей воды моль дисахаридных звеньев . Количество связанной воды зависит от степени сульфатирования гликозаминогликана и природы противоиона натриевые соли,как правило, более гидратированы, чем кальциевые. Предполагается, что в связывании воды участвуют не только ионные, но и гидроксильные группы около двух молекул воды на группу. Следует отметить, что сульфатные и карбоксильные группы направлены наружу спирали. Такая ориентация ионогенных групп, как предполагается, способствует сильному электростатическому взаимодействию с другими химическими соединениями 6. Для образцов хондроитин4сульфата в этаноле наблюдается конформация спирали 2 с проекцией дисахаридного остатка на ось спирали к 0, нм .