Изменение связывающих центров альбумина при психических расстройствах и при стрессе : детектирование флуоресцентным методом с использованием наносекундной спектроскопии

• Автор: Смолина, Наталья Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с. : ил.

Введение

1. Обзор литературы

.1 Некоторые сведения о сывороточном альбумине человека. Строение, функции, связывающие центры.

1.1.1. Метаболизм н распределение альбумина

1.1.2. Распределение и циркуляция.

1.1.3. Функции альбумина в организме

1.1.3.1. Поддержание он коти веского давления плазмы

1.1.3.2. Связывание и транспорт низкомолекулярных веществ и экзогенных

лигандов

1.1.3.3. Альбумин участник окислительновосстановительных реакций в

организме
1.1.3.4. Пластическая функция альбумина.
1.1.3.5. Регуляция гемостаза.
1.1.3.6. Участие в поддержании кислотноосновного равновесия в крови
1.1.3.7. Регуляция апоптоза
1.1.4. Структура молекулы.1Ъ
1.1.4.1. Первичная последовательность
1.1.4.2. Вторичная структура. Домены.
1.1.4.3. Распределение аминокислотных ос гатков и зарядов
1.1.5. Связывающие центры альбумина.
1.1.5.1. Главные лекарственные центры
1.1.5.2. Центр связывания двухвалентных катионов
1.1.5.3. Тиоловая группа остатка Суя.
1.1.5.4. Центры связывания неэстсрифпцироваииьтх жирных кислот
1.1.5.5. Минорные центры
1.1.6. Влияние физикохимических факторов на свойства центров альбумина.
1.1.6.1. Влияние .
1.1.6.2. Повышение температуры
1.1.6.3. Концентрация неорганических солей
1.1.6.4. Связывание лигандов
1.2. Флуоресцентный метод исследования альбумина в биологических жидкостях.
1.2.1. Изучение белков с помощью красителей история вопроса.
Флуоресцентный зонд К.
1.2.2. Понятия эффективная концентрация альбумина ЭКА и общая
концентрация альбумина ОКА
1.2.3. Информативность альбуминового флуоресцентного теста. Клинические
наблюдения.
.3. Кон формационные изменения связывающих центров альбумина как
универсальная реакция на патологический процесс.
1.4. Исследование молекулярных механизмов чувствительности альбуминового флуоресцентного теста. Достижения и нерешенные проблемы.
1.4.1. Определение параметров связывания К с препаратами альбумина
1.4.2. Влияние маркеров связывающих центров альбумина на связывание и
квантовый выход флуоресценции зонда К
2. Материалы к методы исследовании.
2.1. Реактивы
2.2. Спектрофотометри я, спектрофлуорометрия.
2.3. Измерение затухания флуоресценции, анализ амплитуд
2.4. Метод изучения гетерогенного затухания флуоресценции в биологических
образцах метод амплитудного стандарта.
2.4Л. Выбор специальной среды амплитудного стандарта
2.4.2. Расчет парциальных концентраций молекул зонда в альбумине
2.5. Тушение флуоресценции.
2.6. Ультрафильтрация
2.7. Электрофорез.
2.8. Выделение фракции альбумина из сыворотки
2.9. Определение уровня НЭЖК.
2 ЭКА. ОКА, массовая концентрация альбумина.
2 Квантовохимические расчеты.
2 Определение уровня гормонов.
2 Характеристика обследованных больньк
2 Животные
2. 5. Тест открытого поля, и характеристики поведения, острый стресс
2 Статистический анализ результатов.
3. Результаты
3.1. Роль различных центров в связывании альбумином флуоресцентного зонда К
3.1.1. Центры связывания зонда К в молекуле ЧСА.
3.1.2. Оценка соотношения величин ii для разных центров.
3.1.3. Модель связывания зонда К с ЧСА.
3.1.4. I ентры связывания молекул К. не флуоресцирующих в альбумине.
3.1.5. Квантовый выход флуоресценции К в растворе ЧСА.
3.1.6. Влияние маркеров связывающих центров I и II.
на флуоресценцию К из альбумина
3.1.7. Влияние вариации ионного состава среды на затухание флуоресценции К
в альбумине
3.1.8. Обсуждение результатов раздела
3.2. Изменение связывающих центров альбумина при параноидной шизофрении и
тревожной депрессии
3.2.1. Исследование сывороток больных шизофренией с хроническим течением.
3.2.2. Исследование больных первого эпизода шизофрении.
3.2.2.1. Данные стационарной флуорометрии различий между больными и добровольцами не обнаружено.
3.2.2.2. Наносекундная флуоресцентная спектроскопия выявила различия между больными первого эпизода и здоровыми
3.2.3. Свойства альбуминовых центров у больных тревожной депрессией
3.2.3.1. Свойства альбумина у больных депрессией с хроническим течением
3.2.3.2 . Стационарная флуорометрии больные депрессией до лечения, во время
лечения п доноры неразличимы по свойствам альбумина.
3.2.3.3 Ранний эффект терапии тревожной депрессии детектирование с помощью ианосекундной флуоресцентной спектроскопии
3.3. Свойства альбуминовых центров у крыс с различным поведением в тесте
открытого поля.
3.3.1. Избирательность флуоресценции К из альбумина крыс
3.3.2. Тестирование кон формационных свойств альбумина крыс
3.3.3. Поведенческая активность животных в гесте открытого ноля и свойства
альбумина
3.3.4. Перенос альбумином жирных кислот у крыс с различным поведением
3.3.5. Уровень кортизола у животных разных групп.
4. Обсуждение
4.1. Предпосылки и задачи работы
4.2. Формирование сигнала флуоресценции К из альбумина.
4.3. О механизме уменьшения флуоресценции К в присутствии нитрата
4.4. Свойства альбумина и поведенческие особенности крыс
Работы, опубликованные по теме диссертации
Список цитируемой литературы


В прямых опытах на животных выяснить, существует ли связь между особенностями их поведения, реакцией на стресс и свойствами связывающих центров альбумина. Некоторые сведении о сывороточном альбумине человека. Впервые предположение о широком распространении белков в живой природе высказал в первой половине XIX века голландский ученый . Он считал, что во всех клетках животных и растении содержится одно и то же азотистое вещество, которое являся их основой. Это вещество он назвал протеином первый. Впоследствии было установлено, что белок яйца, который при коагуляции становится белым, большой протеин по своей природе. Тогда появилось название альбумин белый. В основу классификации протеинов был положен способ их выделения. Выяснили, что белки можно разделять, осаждая их из растворов с различной концентрацией сульфата аммония. Но одной из первых классификаций , , альбумины это белки, остающиеся в растворе полунасыщенного сульфата аммония при нейтральном цит. Через 0 лет после исследований . В химии альбумины определяют как хорошо растворимые глобулярные белки . Их изоэлектрическая точка находится около 4,8. При i альбумины остаются в растворе сульфата аммония 2,1 М или этанола при 5 С, но преципитируют при 5. Альбумин можно выделить из плазмы при помощи электрофореза и ионообменных методов. При хроматографии альбумин выявляется как опережающий максимум в градиенте элюции в карбоксиметилцеллюлозе и как отстающий пик в диэтштаминоэтилцелполозе . Альбумины содержатся в тканях различных животных и растений. Предмет данной работы сывороточной альбумин человека ЧСА. Это глобулярный белок с молекулярной массой около ООО Да. Единственная копия гена ЧСА находится в проксимальном конце длинного плеча 4й хромосомы . Метаболизм и распределен не альбумина Главным местом синтеза альбумина является печень . Небольшое количество альбумина может образовываться в эмбриональной почке, поджелудочной железе, легких, сердце и даже в сетчатке глаза ,. Физиологическое значение экстрапеченочного синтеза альбумина не вполне ясно. В печени синтез одной полипептидной цени предшественника преальбумина происходит примерно за 1,5 мин, а образование каждой из дисульфидных связей занимает сек. Затем от преальбумина отщепляется Иконцевой гексапептид, и альбумин выходит из синтезирующей клетки. От начала синтеза до этого момента проходит минут. За часа в организме синтезируется г альбумина ,. Катаболизм альбумина происходит практически во всех органах и тканях организма почках, мышцах, слизистых оболочках, в коже, в легких . Время полужизни альбумина в организме человека около дней . Сывороточный альбумин получил свос название вследствие юго, что именно в сыворотке плазме он присутствует в наиболее высокой концентрации гл и составляет по массе около всех белков. В других жидкостях организма концентрация ЧСА ниже в лимфатической системе гл, в межклеточной жидкости 3 гл, в ликворе0,3 гл. В сосудах тела находится г альбумина , вне кровяного русла около 0 г , т. Пулы альбумина плазмы и тканей обмениваются между собой. В норме каждый час около 5 альбумина плазмы покидает сосудистое русло через стенку капилляров в органах и тканях. Двигаясь в составе интерстициальной жидкости между волокнами соединительной ткани, по каналам лимфатической системы альбумин снова может попасть в кровоток. Считают, что в норме за часа весь альбумин плазмы замещается на альбумин, пришедший по лимфатической системе из тканей . Повидимому, это средняя оценка. Некоторые авторы приводят экспериментальные данные, свидетельствующие о более медленном, в течение суток, обмене 9. Скорость обмена альбумина между кровью и тканями не одинакова в различных компартментах тела. Возврат альбумина из кожи и мышц происходит медленнее, чем из печени или кишечника . Циркуляция и распределение ЧСА в организме может изменяться при заболеваниях например, при сердечной недостаточности, нефротическом синдроме, гепатитах, циррозах . Нарушение распределения альбумина между сосудистым и внесосудистым компартмешами оказывает более сильное влияние на фармакокинетику лекарственных препаратов, чем просто изменение концентрации альбумина в плазме .