Адгезивные белки тканей млекопитающих

• Автор: Ямскова, Виктория Петровна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 304 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы. Адгезивные белки тканей позвоночных

1.1. Неточная адгезия общие положения

1.2.Компоненты внеклеточного матрикса.

1.2.1. коллагены

1.2.2. протеогликаны

1.2.3. белки ВКМ

1.3. Велки, участвующие в адгезии клеткаклетка и

1.3.1. иммуноглобулины

1.2.3. кадгерины

1.2.4. селектины
1.2.5. НСАМ
1.4. Особенности структуры молекул адгезивных белшю
1.5. Рецепторы молекул адгезии.
1.6. Взаимодействие цитокипов с ВКМ
1.7 Изменение биосинтеза и структуры компоненпинз клеточного
микроокружения при патологических процессах.
1.8. Пространствснночрункциональная организация межклеточного пространства печени
.1. пространство Диссе, ультраструктуры межклеточного пространства, межгепацнтарное пространство
1.8.2. адгезивные белки печени
1.8.3. изменение специализированных структур межклеточных контактов
гслатоцигов при развитии патологических процессов.
Глава 2. Экспериментальная часть
2.1. Исследование адгезивных свойств клеток печени
2.2. Выделение и очистка адгезинн ых гли ко протеи ков
2.2.1 получение экстрактов из тканей печени и легкого
2.2.2 изоэлектрофокусирование экстрактов ткани.
2.2.3 высаливание тканевых экстрактов
2.2.4 выделение и очистка адгезивного гликопротеина из
сыворотки крови
2.2.5 выделение и очистка инактиватора ГТ.
2.2.6. высокоэффективная жидкостная хроматография.
2.2.7. электрофорез в полиакриламидном геле.
2 2 8 количественное определение белка.
2.2.9. аминокислотный анализ
2.2 анализ углеводного состава
2.2 спектры кругового дихроизма
2.2 определение фосфора и серы в адгезивных белках.
2.3. Исследование биологической активности адгезивных белков
2.3.1. кратковременная органная культура ткани печени мышей.
2.3.2. кратковременная органная культура ткани печени.
с предварительно ослабленными контактами
2.3.3. влияние адгезивных белков на пролиферативную активность
эмбриональных гепатоцитов в органных культурах
2.3.4. измерение силы сцепленносги клеток.
2.3.5. влияние адгезивных белков на интенсивность синтеза белка
и проницаемость ПМ в гепатоцитах при культивировании i vi.
2.3.6. исследование влияния ГП2 на рост культуры фпбробластов
млекопитающих i vi
Глава 3. Методы исследования адгезивных свойств клеток
3.1. дгезиометри чес кие методы
исследования
3.2. Лдгезиметрические методы исследования, основанные на оценке вязкоупругих свойств ткани.
3.3. Выделение адгезивных белков из ткани печени
Глава 4. Гликопротеин 1 ГГ
4.1. Очистка и молекулярные свойства Г
4.2. Биологическая активность ГП
Глава 5. Гликопротеин 2 ГП
5.1 Очистка и молекулярные свойства ГП
5.2. Исследование состояния ГП2 в сыворотках крови
на разных этапах онтогенеза
5.3. Биологическая активность ГП
5.3.1. Влияние ПТ2 на вязкоупругие свойства ткани печени к
легкого млекопитающих i vi.
5.3.2. Влияние ГТТ2 на проницаемость плазматической мембраны
гепатоцитов и на уровень в них синтеза белка т vi.
5.3.3. Влияние ГП2 на пролиферацию гепатоцитов i vi.
5.3.4. Влияние ГП2 на рост фибробластов млекопитающих i vi.
5.3.5. Применение ГП2 в качестве лекарственного средства
Глава б. Гликопротеин З ГПЗ
6.1. Очистка и молекулярные свойства ГПЗ.
6.2. Биологическая активность Г фракции
Глава 7. Адгезивные гликопротеины фракций ГП1, ГП2,
ГПЗ как молекулярные инструменты исследования
7.1. Влияние фракций ГП1, ГП2 и ГПЗ на адгезивные свойства клеток в ткани печени взрослых особей мышей линии и СВ А.
7.2. Биологическое действие ГП1, ГП2, ГПЗфракций на адгезивные и пролиферативные свойства клеток печени позднего плодного периода у мышей линии и СВА.
7.3. Влияние ГП1фракции, выделенной из зрелой ткани легкого крыс, на морфогенез и чувствительность эмбриональной ткани мышей высокораковой линии А к токсическому и канцерогенному действию уретана в органных культурах i vi.
7.4. Стимулирующее влияние на трансформацию асцитной формы тератокарциномы в солидную
Глава 8. Гликопротеины ГП1, ГП2, ГПЗ представители нового семейства функциональных белков клеточною микроокружения
8.1. Новый способ получения высокоочищениых препаратов
адгезивных гликопротеинов.
8 2. Свойства адгезивных гликопротеинов
8.3. Определение молеку.лярной массы, аминокислотного и углеводного составов и фрагментов первичной структуры адгезивных
гликопротеинов.
8 4 Физикохимические свойства адгезивных гликопротеи нов.
8.5 Белки
8.6 Белкимодуляторы биологической активноепш адгезивных
гликопротеинов.
Глава 9. Общее обсуждение результатов. Концепция биологического действия физикохимических факторов в
сверхмалых дозах
Список
литературы
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Распределение иидогена в тканях практически всегда коррелирует с локализацией ламинина и коллагена IV типа, гак как нидоген обладает высокой аффинностью к этим белкам базальных мембран , . Исключение составляют, вопервых, базальная мембрана нелакгирующей молочной железы крысы, в которой были идентифицированы значительные количества ламинина и коллагена IV типа, но отсутствует нидоген, а, вовторых, ранний эмбриональный период у мыши ламинин экспрессируется на стадии восьми бластомеров, в то время как нидоген на 8 стадии внутриутробного развития i, i, i , i, . Сайты взаимодействия нидогенэнтактина и ламинина локализованы в Сконцевом глобулярном фрагменте молекулы иидогена, а сайты связывания с коллагеном IV типа в серединном, также глобулярном участке. В концевой части молекулы иидогена сосредоточены могивы. Нидоген активно связывает ионы кальция, эти сайты находятся также в серединном фрагменте молекулы vi , . Меташтротеазы. В сохранении и поддержании пространственнофункциональной организации ВКМ значительную роль играют протекающие одновременно процессы, с одной стороны, биосинтеза клетками молекул ВКМ а, с другой стороны, деградации матрикса посредством действия эндогенных металлопротеиназ и их ингибитор ов, получивших название I i iii i i, . ВКМ i, , i, v, . К ним относятся коллагеназы, желатиназы действующие на денатурированный коллаген желатин и стромслизииы, всего в настоящее время изучено порядка двенадцати ферментов. Кроме металлопротеаз, в деградации ВКМ в нормально развивающихся тканях участвует ссриновая протеаза плазмин, которая экспрессируется в печени и присутствует в матриксе каждой ткани организма . Все эти ВКМдеградирующие ферменты участвуют в процессах инвазии, имеющих место как при нормальном развитии, например, имплантации трофобласта, так и при патологиях злокачественной инвазии и сопровождающем ранозаживлслис ангиогенезе i, . На примере исследования двух ферментов, обнаруженных на поверхности клеток в разных тканях, активатора плазминогена урокиназного типа и металлопротеазы2 ММР2, было установлено, что локализация металлопротеаз на клеточной поверхности и их ферментативная активность обусловлены взаимодействием со специфическими рецепторами i, , . Для ММР2 таковым является интегрин V3, который, кроме того, функционирует как рецептор гликопротеина ВКМвитронектина. КЛЕТКАКЛЕТКА. Ешс в начале века в работах, проведенных на морских губках и морских ежах, была продемонстрирована способность клеток участвовать в процессах специфической адгезии , i, . Однако прошел длительный период времени прежде, чем был разработан экспериментальный подход к исследованию феномена клеточной адгезии. Основу такого методического подхода составляют иммунохимические методы идентификации адгезивных белков. Активное изучение молекулярных основ клеточной адгезии за несколько последних десятилетий привело к обнаружению большого количества участвующих в адгезионном процессе белков, которые по своим свойствам разделяются на отдельные суперсемейства иммуноглобулины, кадгерины, селекгины и др. Иммуноглобулины. Среди членов этого суперссмейства определенное место занимают белки, участвующие в процессах межклеточной адгезии. Среди таких адгезивных белков наиболее изученными являются , обнаруженный в тканях нейральною происхождения , опосредующий адгезию глиальных клеток и нейронов С. Каждый из этих адгезивных белков содержит 0аминокислотный основной домен связывания подобный домен. Третичная структура этого домена подобна сендвичу, у которою две плоскости образованы антипараплельнмми структурными полипептидами i, а. Число подобных доменов в молекулах разных адгезивных белков этого суперсемейства может вариировать например, содержит 5 таких доменов, ССАМ 4 домена. Каждому адгезивному белку соответствуют несколько изоформ, образующихся в результате альтернативного сплайсинга. Некоторые адгезивные белки являются трасмембранными белками, другие взаимодействуют с ПМ клетки посредством связи, возникающей между углеводной компонентой молекулы и фосфатидилизонитолом. Установлено, что адгезивные белки представители этого суперссмейства.