Анализ участия хлорных каналов плазматических мембран в процессах активации и программированной гибели лимфоидных клеток

• Автор: Баев, Денис Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1 КЛАССИФИКАЦИЯ И РОЛЬ ХЛОР ЫХ КАНАЛОВ

Фоновые хлорные каналы.

Кистозный фиброз.

Двуствольные хлорные каналы.

Высокопроводящие хлорные каналы

Лигандзависимые хлорные каналы

Физиологические процессы в лимфоцитах,

связанные с активное пью хлорных каналов.

ГЛАВА 2. АПОПТОЗ.
Общие сведения о процессах апоптоза
Природа аноптогенных сигналов
Внутриклеточные регуляторы апоптоза
Механизмы регуляции клеточного объема и апоптез
ГЛАВА 3. БЕЛКИ ТЕПЛОВОГО ШОКА
Общая характеристика белков теплового шока.
Индукторы белков теплового шока
Система белков теплового шока
ГЛАВА 4. КЛЕТОЧНЫЙ СТРЕСС
Регуляция антистрессорного ответа клетки.
Факторы теплового шока как детекторы стресса.
Роль БТШ в регуляции антистрессовою ответа.
Плазматическая мембрана и клеточный стресс.
Сигнальные пути, регулирующие стрессиндуцируемый апоптоз
Проапоптотические сигнальные пути
Антиапоггтотигческие сигнальные пути
БТШ и апоптоз.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ ГЛАВА 5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
ГЛАВА 6. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
Дозозависимый эффект действия ИХК.
Влияние плотности клеточных культур на действие ИХК.
Опыты с клетками в бесхлорной среде.
Возможный механизм действия
изменение уровня свободного внутриклеточного кальция
Влияние ИХК на апоптоз в культурах Тклеточных линий
Влияние ИХК на жизнеспособность и рост культуры клеток ЕЬ4.
Влияние ИХК на экспрессию БТШ.
Влияние осмотического шока и ИХК
на жизнеспособность клеток ЕЬ4.
Влияние осмотического стресса и ИХК
на уровень экспрессии БТШ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Данные белки участвуют в различных процессах, таких как фолдинг, рефолдинг, транспорт, утилизация других внутриклеточных протеинов, внутриклеточная сигнализация, защита клеток от повреждающих воздействий. Наряду с этим, БТШ являются поверхностными маркерами трансформированных и инфицированных клеток, участвуют в презентации антигенов и в регуляции иммунного ответа. Хорошо охарактеризована взаимосвязь процессов антистрессового ответа с усилением уровня экспрессии данных белков. В случае же осмотического стресса, активирующею обьс. БТШ в комплексе с регуляцией уровня содержания осмолитов является необходимыми условиями выживаемости клеток. Сказанное выше свидетельствует о том, что анализ взаимосвязи процессов жизнедеятельности лимфоидных клеток и активности ХК является актуальной темой исследования для современной науки. Расширение существующих представлений о механизмах активации лимфоцитов и о возможной связи их с процессами ионного обмена между клеткой и ее микроокружением может предоставить новые возможности для поиска новых методов эффективной регуляции данных процессов. Не мснсс важным представляется изучение взаимосвязанного участия хлорных каналов и БТШ в антистрессовом ответе. Понимание причин и механизмов этого явления будет существенным дополнением не только к описанию фундаментальной системы протективных белков, но также может пролить свет на возможную универсальность данных механизмов не только для лимфоидных, но и для других типов клеток. Целью данной работы является анализ взаимосвязи активности хлорных каналов плазматических мембран лимфоидных клеток различной степени зрелости с процессами их энергетического метаболизма пролиферации, программированной i ибели и антистрессового ответа. Используя селективные ингибиторы хлорных каналов ИХК и культуральную среду, не содержащую ионов хлора, охарактеризовать влияние модуляции трансмембранных потоков хлора на процессы энергетического метаболизма ЭМ и пролиферации нормальных и опухолевых лимфоидных клеток в модельной системе i vi. В модели i vi исследовать влияние клеточного микроокружения факторов среды и аутокринныхпаракринных факторов на эффекты, связанные с модуляцией трансмембранных потоков ионов хлора у лимфоидных клеток. Проанализировать возможную взаимосвязь влияния модуляции трансмембранных потоков хлора на процессы энергетического метаболизма и пролиферации лимфоидных клеток с активацией кальцийзависимых сигнальных путей. Проанализировать взаимосвязь активности ХК с процессом программированной клеточной гибели лимфоцитов в моделях спонтанного и индуцированного апоптоза лимфоидных клеток. Охарактеризовать влияние блокирования хлорных каналов на экспрессию БТШ лимфоидными клетками. Провести анализ влияния активности ХК на процессы антистрессового ответа лимфоидных клеток в модели их осмотического шока. В рамках данной работы был впервые получен ряд результатов, расширяющих существующие представления о роли трансмембранных потоков ионов хлора в процессах жизнедеятельности различных популяций лимфоидных клеток. В частности, в ходе исследования влияния различных доз ИХ К на процессы ЭМ и пролиферации лимфоидных клеток разной степени зрелости было зарегистрировано стимулирующее действие малых и средних доз ИХК на ЭМ и пролиферацию незрелых форм клеток клеток костного мозга, КМ, но в то же время, действие ИХК характеризовалось угнетением данных процессов в популяциях высокодифференцированных лимфоцитов бесхлорная среда обладала выраженным ингибирующим действием на ЭМ лимфоидных клеток. Это свидетельствует о важной роли ионов хлора в созревании и функциональной активности лимфоцитов. Наряду с этим, полученные результаты продемонстрировали прямую связь стимулирующего действия ИХК на незрелые формы лимфоцитов с модуляцией концентрации внутриклеточного Са2. Было также зарегистрировано протсктивное действие ИХК как в условиях спонтанного и индуиирозанного апотоза , так и в условиях гипотонического стресса. Впервые для иммунокомпетентных клеток была выявлена связь вышеупомянутых эффектов с увеличением уровня экспрессии протективных БТШ .