Индукция дифференцировки клеток нейробластомы N1E-115 неспецифическими факторами культуральных сред

• Автор: Мякишева, Светлана Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 115 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Нейробластома как модель для изучения механизмов регуляции дифференцировки нервных клеток в культуре

1.1.1. Происхождение и краткая характеристика клеточных

линий нейробластом

1.1.2. Получение и характеристика клеточных

линий нейробластом

1.2. Диффсрснцировка иейробластомы в культуре

1.2.1. Экспрессия дифференцировки

1.2.2. Морфологическая дифференцировка

1.2.3. Биохимическая дифференцировка

1.2.4. Электрофизиол огическая дифференцировка
1.2.5. Регуляция экспрессии признаков дифференцировки
1.3. Методы экспериментальной регуляции клеточной пролиферации и дифференцировки в культуре
1.3.1. Неспецифические индукторы клеточной дифференцировки
1.3.2. Ионная регуляция дифференцировки и регенерации клеток
1.3.3. Экспериментальные методы регуляции внутриклеточной концентрации кальция и
1.3.4. Ионная регуляция метаболизма и морфологической дифференцировки изолированных нейронов моллюсков
1.3.5. Влияние сывороточных компонентов на пролиферацию и дифференцировку клеток
1.3.6. Морфологическая дифференцировка клеток иейробластомы, индуцированная диметилсульфоксидом
1.4. Авермектины их свойства и характеристика
1.5. Хемотропизм и аутокринная регуляция
1.6. Взаимоотношение между пролиферацией, днфференцировкой
и апоптозом в развивающейся нервной системе
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Условия культивирования клеток нейробластомы 1Е
2.2. Критерии оценки морфологической днфференцировки клеток нейробластомы методом световой микроскопии
2.3. Условия культивирования нейронов моллюсков
2.4. Критерии оценки морфологической днфференцировки нейронов моллюсков методом световой микроскопии
2.5. Оценка морфологической днфференцировки нейробластомы методом электронной микроскопии
2.6. Электрофизиологические исследования на бислойных липидных мембранах БЛМ
2.7. ДСНэлектрофорсз
2.8. Методы оценки ошибок измерений
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Морфологический анализ процессов пролиферации и днфференцировки методом световой микроскопии
3.2. Морфологический анализ днфференцировки нейронов моллюска
3.3. Морфологический анализ процессов пролиферации и днфференцировки методом электронной микроскопии
3.4. Анализ необратимой морфологической днфференцировки нейробластомы
3.5. Влияние среды на дифференцировку клеток нейробластомы
3.6. Влияние ионного состава среды на дифференцировку клеток нейробластомы
3.7. Влияние осмотичности среды на дифференцировку клеток нейробластомы
3.8. Влияние аминокислот, витаминов и углеводов на
дифференцировку клеток нейробластомы.
3.9. Влияние сыворотки на дифференцировку клеток нейробластомы
3 Влияние на дифференцировку клеток нейробластомы различных фармакологических препаратов
3 Определение продуктов метаболизма, обладающих мембранной активностью
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Перекись водорода функционирует как сигнальная молекула, вовлеченная в энергетический обмен и ответы на стресс или сигналы роста. В последние десятилетия интенсивно изучались взаимоотношение между пролиферацией, дифференцировкой и апоптозом в развивающейся нервной системе. Программируемая гибель нейронов наблюдалась не только в клеточной культуре, но и при многочисленных патологиях и старении ii , . Однако механизм нейрональной гибели все еще не ясен. Поиски универсальных механизмов, осуществляющих разнообразные переключения клеточных программ, также к успеху не привели. Для решения фундаментальной проблемы дифференцировки нервной ткани, также как и для последующей реализации онкологических задач, необходимо выявить роль отдельных компонентов сложных культуральных сред в процессах переключения генетических программ клетки в условиях, неблагоприятных для пролиферации. Остается неясно, в какой степени дифференцировка клеток в неблагоприятных для пролиферации условиях предшествует гибели клеток и соответственно может рассматриваться адаптационным механизмом. Цель н задачи исследования. Целыо работы является сравнительное исследование кинетики дифференцировки и гибели клеток нейробластомы в условиях неблагоприятных для пролиферации i vi. Исследовать влияние неблагоприятных для пролиферации значений среды на кинетику дифференцировки и гибели клеток. Исследовать влияние неблагоприятных для пролиферации концентраций ионов , К и Са2 культуральных сред на кинетику дифференцировки и гибели клеток. Исследовать кинетику дифференцировки и гибели клеток в гипо и гиперосмотических средах, неблагоприятных для пролиферации. Исследовать влияние углеводов, аминокислот и витаминов на кинетику дифференцировки и гибели клеток нейробластомы в бессывороточных средах. Исследовать возможность дифференцировки клеток нейробластомы под действием фармакологических препаратов, способных вызвать клеточныую гибель. Исследовать обратимость дифференцировки клеток нейробластомы, вызванной неблагоприятными для роста факторами культуральной среды. Научная новизна. Минимальная скорость дифференцировки и максимальная скорость последующей гибели дифференцированных клеток регистрировались при 7,5. Времена дифференцировки и гибели дифференцированных клеток коррелировали с содержанием ионов и осмотичностью для всех сред, кроме среды с высоким содержанием аминокислот. Скорости дифференцировки клеток нейробластомы в зависимости от содержания аминокислот и углеводов в среде имели выраженный минимум, однако времена гибели клеток были прямо пропорциональны содержанию метаболитов. Практическая ценность. Установлены количественные параметры компонентов питательных сред, оптимизирующих дифференцировку клеток нейробластомы. Установлены количественные значения компонентов сред, способствующих длительному выживанию дифференцированных клеток. Предложены пути оптимизации культуральных сред, которые в будущем могут быть использованы для коррекции опухолевого микроокружения i viv. Апробация работы. Основные материалы исследований докладывались на 5й Москва, и 8й Казань, ВосточноЕвропейских конференциях Международного общества нейробиологов i v , II Съезде биофизиков России Москва, , XVI рабочем совещании Консервация генетических ресурсов Пущино, , XVIII Съезде физиологов России Казань, , научной конференции От современной фундаментальной биологии к новым наукоемким технологиям Пущино, , . ИБК РАН Пущино, , IV и VI Международных конференциях по функциональной нейроморфологии Колосовские чтения СанктПетербург, , , IX международной школе конференции молодых ученых Пущино, . Публикации. По теме диссертации опубликовано работа, из них статей в отечественной и зарубежной печати, тезисов и 1 авторское свидетельство. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения полученных результатов, обсуждения результатов, заключения, выводов, списка работ, опубликованных по теме диссертации и списка использованной литературы. Библиография включает 5 ссылок.