Стабильные и нестабильные хромосомные аберрации в лимфоцитах крови человека, индуцируемые излучениями с разными ЛПЭ

• Автор: Репин, Михаил Васильевич
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Дубна
• Количество страниц: 106 с. : ил.

Оглавление

Список условных сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2. Биологические материалы и методы исследования.

2.1. Получение лимфоцитов крови человека.

2.2. Физические характеристики излучений и условия облучения.

2.2.1. Гаммаоблучение

2.2.2. Облучение ускоренными ионами азота .

2.2.3. Облучение протонами с энергией 1 ГэВ.

2.3. Культивирование лимфоцитов после облучения. Приготовление

препаратов клеток для цитогенетического анализа
2.4. Флуоресцентная гибридизация i i Iметод
2.5. Анализ лимфоцитов метафазным и Iметодами
Глава 3. Результаты исследования.
3.1. Клетки с хромосомными аберрациями.
3.2. Общее число хромосомных аберраций.
3.3. Типы хромосомных аберраций
3.3.1. Стабильные аберрации хромосом транслокации и инсерции
3.3.2. Анализ нестабильных хромосомных аберраций стандартным
метафазным и Iметодами.
3.3.3. ОБЭ протонов и ионов азота .
3.3.4. Математические подходы для сопоставления частот хромосом
ных аберраций, выявляемых I и стандартным метафазным методами.
3.4. Калибровочные кривые для оценки доз по тесту стабильные абер
рации хромосом
Глава 4. Обсуждение результатов
ВыводыВ
Заключение Список литературы
Список условных сокращений
ДНК Дезоксирибонуклеиновая кислота ЛПЭ Линейная передача энергии ОБЭ Относительная биологическая эффективность РНК Рибонуклеиновая кислота I 4,6диамидино2фенилиидол I i i iii I iii I i i i iii I i Iiii i Фосфатносолевой буфер I Пропидиум иодид
Стандартный раствор цитрата натрия
Введение
Актуальность


Это обусловлено необходимостью решения многих задач радиоэкологических проблем, вопросов нормирования лучевых нагрузок у лиц, работающих в смешанных полях ионизирующих излучений, проблем радиационной безопасности длительных космических полетов человека, использования различных источников ионизирующих излучений для лучевой терапии онкологических заболеваний и др. Наименее изученным является мутагенное действие плотноионизирующих излучений. Прежде всего, это касается исследования закономерностей и механизмов индукции мутаций у клеток высших эукариот клеток млекопитающих и человека. Практически не изучены закономерности образования стабильных хромосомных мутаций при действии излучений разного качества. Исследование закономерностей и механизмов такого типа повреждений генетических структур представляется весьма важным, поскольку стабильные аберрации способны длительно сохраняться в популяциях облученных клеток и с ними связывается инициация ряда онкологических заболеваний. Так, в настоящее время установлена корреляция между возникновением хронической миелоидной лейкемии, острой миелоидной лейкемии, промиелотической лейкемии, лимфомы Беркитта и наличием транслокаций между различными хромосомами , 1 8, 1 , г8 , соответственно. Реализация программ длительных космических полетов человека ставит задачу детального изучения биологического действия протонов релятивистских энергий, составляющих значительную часть спектра космических излучений. В этой связи крайне важно определить биологическую эффективность таких излучений на основе различных показателей и, прежде всего, на основе учета индукции стабильных хромосомных аберраций. Широко известные классические цитогенетические методы, применяемые для целей биологической дозиметрии, основаны на учете таких аберраций, как дицентрики и кольца . Измерив частоту таких аберраций в клетках облученного организма или ткани и сравнив с калибровочной кривой, полученной для соответствующих клеток и вида излучения, можно определить дозу, полученную организмом в результате облучения. Однако возможность оценки поглощенной дозы при этом ограничивается острым периодом после лучевого воздействия, поскольку анализируемые хромосомные аберрации являются нестабильными и со временем быстро элиминируют из популяции облученных клеток. Большим достижением явилась разработка в последние годы техники флуоресцентной гибридизации i i i i iii Iметода i . Viii . Он дает возможность выявлять отдельные хромосомы человека посредством их окрашивания с использованием специфических проб с уникальными нуклеотидными последовательностями ДНК этих хромосом i С. Vi . Iметод позволяет выявлять стабильные аберрации исследуемых хромосом в облученных и необлученных клетках. С его помощью рядом авторов . Это привлекло к ним внимание, так как появилась возможность ретроспективной оценки дозы лучевого воздействия на человека. Iметода при действии рентгеновских и улучей. В последние годы появляются единичные работы по исследованию стабильных хромосомных аберраций, возникающих в клетках человека при действии плотноионизирующих излучений ачастиц ii . М. , К. I. . В связи с изложенным, учитывая актуальность, научную и практическую важность исследований генетического действия ионизирующих излучений разного качества, а также отсутствие достаточно полных сведений в этой области, нами было проведено исследование закономерностей формирования стабильных и нестабильных аберраций хромосом в лимфоцитах человека при действии излучений с разными ЛПЭ. Цель и основные задачи исследования. Вмкм, ускоренных ионов азота I4 ЛПЭ кэВмкм. Научная новизна. ИБНметодом, на суммарные геномные частоты хромосомных аберраций, применимая для разных геномов и случаев использования нескольких флуорохромов одновременно. Она была применена для расчета суммарных геномных частот аберраций в лимфоцитах крови человека, облученных ускоренными ионами азота И и протонами с энергией 1 ГэВ, на основе данных ПБНанализа аберраций хромосом1 и 2. Научнопрактическая значимость работы. Исследования стабильных хромосомных аберраций после воздействия ионизирующими излучениями разного качества имеют фундаментальное значение для установления количественных и качественных закономерностей их формирования в клетках человека.