Определение частоты мутантных клеток по локусам гликофорина А и Т-клеточного рецептора с целью формирования групп риска в отношении развития рака щитовидной железы

• Автор: Верещагина, Анна Олеговна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Обнинск
• Количество страниц: 103 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Изменения генетического материала соматических

клеток при воздействии ионизирующего

излучения.

1.1.1. Индукция соматического мутагенеза механизмы

формирования структурных и генных мутаций

1.1.2. Индукция нестабильности генома

1.2 Ключевая роль мутаций в канцерогенезе.

1.3 Радиационноиндуцированный канцерогенез.

1.4 Методы оценки мутагенеза в соматических клетках по

отдельным генным локусам и возможность их применения в популяционных исследованиях.
1.5. Высокий уровень соматического мутагенеза, как
показатель повышенного риска развития онкопатологии
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика обследованных групп
2.1.1. Характеристика группы лиц, обследованных с помощью
вРАтеста
2.1.2. Характеристика группы лиц, обследованных с помощью
ТСЯтеста
2.2. Подготовка проточного цитометра к работе
2.3. Определение частоты СРАмутантных клеток
2.3.1. Фенотипирование крови доноров.
2.3.2. Фиксация и окрашивание клеток.
2.3.3. Биотинилирование антител к Мформе гликофорина А.
2.4. Определение частоты ТСЛ мутантных клеток.
Статистический анализ полученных результатов
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Частота мутантных клеток в группах контрольных
необлученных лиц.
3.1.1. Частота мутантных по ТСлокусу клеток у контрольных доноров
3.1.2. Частота вРАмутантных клеток у контрольных лиц
3.2. Частота клеток с генными мутациями у жителей
радиационнозагрязненных территорий Орловской
области
3.2.1. Частота вРАмутантных клеток
3.2.2. Частота ТСЯ мутантных клеток.
3.3. Частота клеток с генными мутациями у жителей
радиационнозагрязненных территорий Орловской
области в зависимости от возраста на момент начала радиационного воздействия
3.3.1. Частота вРАмутантных эритроцитов.
3.3.2. Частота ТСЯ мутантных клеток.
3.4. Частота мутантных клеток у лиц со злокачественными
новообразованиями ЩЖ.
3.4.1. Частота ТСЯ мутантных клеток.
3.4.2. Частота вРАмутантных клеток
ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Частота мутантных клеток у контрольных доноров.
4.2. Влияние хронического облучения в малых дозах на
уровень мутантных клеток по ТСЯ и вРАлокусам.
4.2.1. Влияние хронического облучения в малых дозах на уровень мутантных клеток по локусу гликофорина А.
4.2.2. Влияние малых доз хронического облучения на уровень
мутантных клеток по ТСЯлокусу
4.3. Повышенная частота мутантных клеток как критерий для формирования группы риска развития онкологических заболеваний.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В связи с этим представляет интерес исследование генных мутаций в соматических клетках людей, подвергающихся низкоинтенсивному радиационному воздействию в малых дозах вследствие проживания на загрязненной радионуклидами территории. Одно из самых неблагоприятных последствий воздействия радиации индукция злокачественных новообразований. Радиационное воздействие играет роль пускового механизма в канцерогенезе, а дальнейшее развитие событий зависит от состояния репарационной, иммунной, эндокринной и других систем организма, ответственных за реакцию организма на повреждающее воздействие. При обследовании людей, облученных в малых дозах вследствие проживания на загрязненных территориях, показано, что только у части лиц развиваются вредные последствия. С г. РЩЖ, особенно среди тех лиц, кто находился в детском возрасте на момент аварии, поскольку радиочувствительность ЩЖ особенно высока у детей младшего возраста. В настоящее время в Брянской и Орловской областях показатель заболеваемости РЩЖ для лиц, облученных в детском возрасте, в 35 раз превышает аналогичный по стране в целом. В связи с этим проблема выявления групп повышенного канцерогенного риска является одной из самых актуальных. Поскольку известно, что мутации играют ключевую роль в канцерогенезе, то подход для выявления групп повышенного канцерогенного риска, основанный на оценке уровня соматического мутагенеза в организме, можно рассматривать как один из наиболее перспективных. Правомерность такого подхода следует из представления, что возникновение мутаций, как правило, является стохастическим процессом, поэтому можно предположить, что количество клеток с мутациями в любом гене в том числе и не имеющем прямого отношения к канцерогенезу отражает общий уровень соматического мутагенеза в организме. В таком случае, лица с высокой частотой мутаций в генах, даже непосредственно не связанных со злокачественной трансформацией, будут составлять группу риска в отношении развития опухолей. Известные к настоящему времени факты . i . Замуласва и др. Орлова, , подтверждают эту гипотезу. Таким образом, не вызывает сомнений актуальность исследования соматического мутагенеза в отдельных генных локусах после радиационного воздействия. Среди существующих методов определения генных мутаций наиболее перспективными следует считать проточноцитометрические методы выявления клеток, мутантных по локусу Тклеточного рецептора тест и по локусу гликофорина тест. До недавнего времени эти тесты использовались наряду с традиционными методами определения структурных мутаций для ретроспективной дозиметрии i . АЫуата М е Саенко и др. В отношении использования этих методов для выявления лиц с высоким уровнем соматического мутагенеза в литературе имеется всего несколько публикаций АИуата е1 а Замулаева и др. В отношении патологии щитовидной железы ЩЖ подобных исследований не проводилось. Поэтому исследование потенциальной возможности использования оценки уровня соматических генных мутаций у больных РЩЖ, проживающих в загрязненных радионуклидами районах, представляет особый интерес в связи с повышенной частотой заболеваний ЩЖ и с тем, что РЩЖ у части таких больных обусловлен радиационным воздействием. В настоящее время доказано, что облучение ЩЖ ионизирующим излучением приводит к увеличению частоты как злокачественных, так и доброкачественных заболеваний ЩЖ. Поскольку доброкачественные узловые новообразования в ЩЖ часто ведут к злокачественной трансформации, то исследование уровня генных мутаций в соматических клетках у лиц с выявленной узловой патологией ЩЖ и проживающих нг. РЩЖ. Таким образом, целью данной работы являлось выяснение нескольких вопросов. Первый из них действительно ли у лиц, проживающих на загрязненных радионуклидами территориях, и больных РЩЖ наблюдаются повышенные частоты клеток с генными мутациями. Второй является ли применение вРА и ТСЯтестов перспективным для формирования групп риска в отношении возникновения РЩЖ. Интерес представляла также оценка информативности указанных тестов для биодозиметрии при разных дозах облучения щитовидной железы.