Исследование механизма действия липополисахаридов различной структуры на функции нейтрофилов человека

• Автор: Загряжская, Анна Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

Часть 1. Функции нейтрофилов в организме.

Часть 2. Регуляция активности 5липоксигсназы и синтеза лейкотриенов

1.2.1. Метаболизм арахидоновой кислоты и физиологическая активность лейкотриенов

1.2.2. Особенности строения и экспрессии фермента 5липоксигсназы.

1.2.3. Регуляция активности 5липоксигеназы в клетке

Часть 3. Бактериальные липополисахариды эндотоксины.

1.3.1. Огроение и биологическая активност ь лииополисахаридов.

1.3.2. Взаимодействие лииополисахаридов с клеткой иммунной системы

Часть 4. Биосинтез оксида азота

1.4.1. Общие сведения о синтазах оксида азота.
1.4.2. Некоторые факторы, регулирующие активность синтаз оксида азота.
1.4.3. Физиологические свойства оксида азота
Глава 2. Экспериментальная часть.
2.1. Реактивы и материалы.
2.2. Подготовка рабочих препаратов
2.3. Методы исследования
Глава 3. Результаты и обсуждение.
Часть 1. Исследование механизма действия лииополисахаридов различной структуры из ii на функции нейтрофилов человека
3.1.1. Эффекты различных хемотапов из i серотипа ii на опсонинзависимый фагоцитоз и адгезию нейтрофилов к коллагену.
3.1.2. Роль 5липоксигеназы в эффектах хсмотипов на фагоцитоз частиц нейтрофилами
3.1.3. Исследование 5липоксигсназной активности в нейтрофилах, стимулированных
3.1.4. Эффекты хемотипов на высвобождение арахидоновой кислоты и транслокацию 5липоксигеназы к ядру в нейтрофилах.
3.1.5. Образование активных форм кислорода и азота в нейтрофилах под действием различных форм
3.1.6. Детекция 0 синтазы в нейтрофилах человека.
3.1.7. Роль 0 синтазы в функциях нсйтрофилов человека, прай.чированных различными хсмотипами .
3.1.8. Прямое действие 0 на активность 5липоксигеназы в бесклеточной системе.
3.1.9. Роль гуанилатциклазы и протеин киназы в эффектах хемотипов на активность в нейтрофилах.
3.1 Роль цитоплазматической фосфолипазы А2 в действии различных хемотипов на образование оксида азота в нейтрофилах.
3.1 Роль протеин киназы С в эффектах различных хемотипов на образование оксида азота в нейтрофилах
3.1 Предлагаемый механизм действия липополисахаридов различной структуры из ii на фагоцитоз опсонизированного зимозана нейтрофилами человека
Часть 2. Регуляция биосинтеза лейкотриенов под действием из i холестерином и другими липидами.
3.2.1. Влияние из i на фагоцитоз частиц нейтрофилами человека
3.2.2. Влияние из i на синтез 5лииоксигеназных метаболитов в нейтрофилах человека.
3.2.3. Эффекты и липидов на активность 5липоксигеназы в нейтрофилах человека
Выводы.
Литература


Нейтрофилы способны к амебоидному движению, они обладают положительным хемотаксисом по отношению к специфическим хемоаттрактантам, бактериальным токсинам, частям и продуктам распада бактерий или клеток организма и комплексам антиген антитело. Нейтрофилы являются короткоживущими клетками, после выполнения защитной функции например, фагоцитоза они уходят в апоптоз и перерабатываются макрофагами. Полупериод нахождения нейтрофилов в кровяном русле около часов, в тканях 4 5 дней рис. Рис. Схема основных событий, связанных с миграцией нейтрофилов к очагу воспаления 2. I роллинг нейтрофила при участии адгезионных рецепторов селектинов по поверхности эндотелия сосудов 2 адгезия нейтрофила к эндотелию при участии адгезионных молекул интегринов 1 и I 1 i i 1 3 трансмиграция нейтрофила в ткань 4 хемотаксис по отношению к бактериальным продуктам и хемоаттрактантам к очагу воспаления 5 осуществление нейтрофилом защитной функции, в частности, фагоцитоз поглощение бактерий 6 апоптоз клетки. Нсйтрофнлы поступают в очаг воспаления благодаря хемотаксису. При взаимодействии клеточных рецепторов с микроорганизмом нейтрофил активируется и окружает его выростами цитоплазмы, заключая в фагосому. Классы опсонннзависнмых и независимых рецепторов участвуют в процессе фагоцитоза. Опсониннезависнмый фагоцитоз осуществляется при участии, в частности, рецепторов дектина1 и лектиновых рецепторов Стипа. Доказано, что при опсонинзависимом и независимом фагоцитозе происходит активация различных сигнальных каскадов . На рис. Как только бактерии поступают внутрь клетки, цитоплазматические гранулы сливаются с фагосомой с образованием фаголизосомы, где происходит высвобождение содержимого гранул и деградация поглощенных микроорганизмов рис. Бактерицидный арсенал нейтрофнлов состоит из окислительных и неокислительных процессов, которые активируются одновременно при фагоцитозе. Неокислительная деградация содержимого фаголизосомы осуществляется при участии гидролитических ферментов и антимикробных белков, которые высвобождаются из азурофильных и специфических гранул в процессе дегрануляции. При стимуляции нейтрофнлов, в частности, в процессе фагоцитоза, происходит активация оксидазы плазматической мембраны, которая осуществляет перенос электронов от iii i ii к молекулярному кислороду с образованием супероксидиона V рис. Цепь превращений Ог в клетке приводит к образованию группы кислородсодержащих радикалов и реакционноспособных молекул, среди которых пероксид водорода Н2О2 и гидроксилрадикал ОН, которые участвуют в окислительной деструкции объектов, заключенных в фагосому. Супероксидион Ог взаимодействует с 0 оксид азота II с образованием сильного окислителя иерокешштрита . Таким образом, супероксиднон, и продукты их превращений активные формы кислорода и азота являются мощной антимикробной системой, направленной на элиминирование бактериальной инфекции. Также показано, что эти кислородсодержащие реакцнонноспособные молекулы способны модулировать x статус клетки и играть роль медиаторов сигнальной трансдукции в регуляции функций нейтрофнлов 9. Нейтрофилы осуществляют внутриклеточное разрушение инфекционных агентов, но происходящее при этом высвобождение цитотоксических молекул во внеклеточное пространство может привести к повреждению тканей. Рис. Опсонинзависимый фагоцитоз микроорганизмов и бактерицидная активность нейтрофилов 1. Указано, что опсонинзависимый фагоцитоз осуществяегся при участии рецепторов РсИ. СЯ. После образования фагосомы, микроорганизмы подвергаются разрушению под действием антимикробных белков, которые выделяются при слиянии фагосомы с цитоплазматическими гранулами азурофильными и специфическими, а также окислительной деструкции с участием кислородсодержащих рсакционноспособных молекул. Ключевым звеном в процессе образования многих кислородсодержащих активных форм является супероксидион Ог, который образуется под действием ТЛИРНоксидазы. МЭРНоксидаза представляет собой мультикомпонентный фермент, ассоциация субъединиц которго на плазматической мембране в том числе мембране фагосомы происходит при активации клетки.