Синтез и изучение свойств липодипептидов для самоорганизующихся систем доставки функциональных генов

• Автор: Буданова, Ульяна Александровна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 110 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

Компоненты катионных липосом

Комплекс амфифилДНК

Средства для модификации липосом

Включение в липосомы векторов активного нацеливания на клеткумишень

Контролируемое высвобождение содержимого липосом

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Синтез липодипептидов на основе эфиров Тглутаминовой кислоты и ,глутамина

Исследование свойств агрегатов, формируемых полученными соединениями в водной
Изучение свойств комплексов катионные липодипептидыДНК.
Определение эффективности трансфекции полученных соединений.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Размещение соответствующего Знетранслируемого участка ЬТЯ непосредственно после кодирующих участков ДНК также важно, так как это обеспечивает стабильность мРНК, эффективность транспортировки мРНК в цитоплазму и может повысить эффективность трансляции мРНК. Генетические последовательности, расположенные на 5 и Зконцах кодирующих участков, могут быть встроены для регулирования посттрансляционных процессов и секреции белка. Для обеспечения контроля нал функционированием применяемых генов в систему экспрессии могут быть введены генные включатели, для этого используется введение определенных низкомолекулярных веществ. Однако, эффективная доставка систем экспрессии генов на основе плазмид во внутриклеточное пространство ограничивается их поверхностными свойствами, а также их повышенной чувствительностью к нуклеазам. Плазмида представляет собой гидрофильную макромолекулу кДа с общим отрицательным зарядом, величина и плотность которого зависят от количества пар оснований и конформации ДНК, неспособную эффективно проникать через биологические мембраны, которые также заряжены отрицательно . Плазмиды не могут преодолевать биологические барьеры, такие как непрерывный капиллярный эндотелий, кератинизированный эпителий, эпителий слизистой оболочки или барьер костного мозга. Вдобавок, проникновение плазмиды в клетку без предварительного изменения проницаемости плазматической мембраны иили разрушения эпителиальной мембраны после эндоцитоза представляет собой весьма неэффективный процесс. Диффузия плазмиды через внеклеточные матрицы, такие как соединительные ткани в скелетных мускулах, также сильно ограничена 4. Существуют различные средства доставки генов в клетки. Физические методы схематически изображены на рис. Рис. Некоторые физические методы доставки генетического материала в клетки. Они включают в себя разнообразные подходы, основанные на формировании пор в мембране клетки с использованием различных физических методов, в их числе воздействие на клетку электрического поля методы электропорации, лазерное излучение, обработка клеток ультразвуком, осмотическая трансфекция. Даже механическое повреждение клеточной мембраны в присутствии ДНК может быть использовано для трансфекции генов. Макроинъекция ДНК в ткани и микроинъекция в ядро клетки также могут рассматриваться как физические методы переноса генетического материала. Перенос генов в клетки и ткани осуществляется также с помощью трансфекции с использованием в качестве переносчиков функциональных генов микрочастиц из золота и вольфрама, выстреливаемых с достаточно высокой скоростью генной пушкой. Биологические методы включают использование различных клеток и клеточных структур . Наиболее эффективными системами генного переноса признаны вирусные векторы , . Их отличает очень высокая эффективность доставки, однако существуют и значительные ограничения для применения, такие как мутагенность, капцсрогеиность, иммунный ответ и затратность по времени. После смерти пациента в ходе клинических испытаний вирусного вектора для генной доставки в году невирусные векторы, такие как катионные липосомы и полимеры, были предложены в качестве перспективной альтернативы . Химические методы доставки представлены разнообразными подходами. Вопервых, это метод осаждения ДНК в присутствии фосфата кальция и его модификации использование фосфата стронция или фосфата марганца. Последняя модификация, как показано, болсс эффективна, чем преципитация ДНК с фосфатом кальция. Вовторых, в качестве систем переноса гена используются искусственные макромолекулярные комплексы. Они включают в себя различные поликатионы, как природные, так и синтетические полилизин, полиэтиленимин, другие полимеры . Список может быть дополнен также природными катионными белками. Процессы взаимодействия таких комплексов с клетками имеют некоторое сходство с проникновением в клетку вирусных частиц . Однако, анализ литературных данных свидетельствует, что наиболее перспективными в качестве невирусиых систем для трансфекции являются разнообразные катионные липосомы, сформированные из синтетических амфифильных.