Взаимодействие протимозина альфа с адаптером убиквитин-лигазы белком Keap1

• Автор: Мельников, Сергей Викторович
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 92 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ФУНКЦИИ ПРОТИМОЗИНА а

обзор литературы.

1.1. Протимозин а РгоТа многофункциональный белок позвоночных животных

1.2. Структура РгоТа.

1.2.1. Аминокислотный состав и первичная структура РгоТа.

1.2.2. Пространственная струкгура РгоТа.

1.2.3. Поспрансляционные модификации РгоТа

1.3. Количество РгоТа в клетках различных тканей

1.4. Внутриклеточная локализация РгоТа
1.4.1. РгоТа содержит сигнал ядерной локализации
1.4.2. РгоТа ядерный белок, непрерывно мигрирующий между ядром и цитоплазмой
1.4.3. В ядре клетки РгоТа сосредоточен в гранулообразных доменах
1.5. Внутриклеточные функции РгоТа
1.5.1. РгоТа ускоряет прохождение клетки по циклу деления.
1.5.2. РгоТа является гистонсвязывающим белком i vi и в лизатах клеток и деконденсирует хроматин клеток при сверхпродукции.
1.5.3. РгоТа специфически усиливает экспрессию некоторых генов
1.5.4. РгоТа подавляет апоптотический путь клеточной смерти и расщепляется в процессе апоптоза.
1.5.5. РгоТа взаимодействует с белком .
2. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ВЗАИМОДЕЙСВТИЯ ПРОТИМОЗИНА а С БЕЛКОМ КЕАР1 результаты и обсуждение
2.1. РгоТа стабильный белок, не подверженный деградации протсасомой
2.2. РгоТа не подвержен убиквитинироваиию.
2.3. РгоТа не оказывает влияния на степень убиквитииирования транскрипционного фактора 2.
2.4. РгоТа устойчив к Кеар1 зависимому экспорту из ядра.
2.5. Устойчивость РгоТа к Ксар1 зависимому экспорту из ядра обусловлена сигналом ядсрной локализации в структуре РгоТа
2.6. Заключение
3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
3.1. Используемые штаммы микроорганизмов, клеточные линии, реактивы и среды
3.2. Используемое оборудование и методы
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


РгоТа не оказывает влияния на степень убиквитииирования транскрипционного фактора 2. РгоТа устойчив к Кеар1 зависимому экспорту из ядра. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. Для аминокислот и их производных использовались обозначения, рекомендуемые комиссией по номенклатуре Международного союза чистой и прикладной химии II и Международного союза биохимиков I. В природе, помимо свернутых в глобулы и фибриллы белков, существует малоисследованная группа полипептидов, лишенных стабильных элементов вторичной и третичной структуры. Эти белки, называемые несвернутыми iv или природно неупорядоченными iii i, существуют в клетке в виде переходящих друг в друга конформеров неупорядоченного клубка, но это не мешает им выполнять важные биологические функции как в процессах нормальной жизнедеятельности клетки, так и в процессах адаптации к различным воздействиям на клетку окружающей среды. Данная работа посвящена исследованию свойств несвсрнутого белка протимозина а. Этот белок обладает целым рядом уникальных свойств, необычных для большинства белковых молекул. Исследования последних лет показали, что протимозин а обладает множеством биологических функций и для некоторых из них был установлен механизм. В частности, в нашей лаборатории было показано, что протимозин а является молекулярным партнером белка , который, в свою очередь, был охарактеризован как адаптер убиквитинлигазы, направляющий белки на деградацию. В данной работе наши усилия были направлены на выявление возможных последствий для протимозина а от его взаимодействия с белком . Впервые протимозин а РгоТа был обнаружен в клетках тимуса крысы в ходе работы но целенаправленному поиску предшественника пептидного гормона тимуса тимозина i 1. В этой работе было показано, что клетки тимуса содержат белок, концевая часть которого полностью идентична Та. По этой причине белок получил название протимозина а, и его стали рассматривать как предшественник гормона. В скором времени было установлено, что полноразмерный РгоГа присутствует не только в клетках тимуса, но практически во всех тканях организма крысы 2, мыши 3 и человека 4. В его структуре не было найдено сигнальной последовательности, отвечающей за секрецию белка из клетки, но был найден сигнал ядерной локализации. Это позволило предположить, что РгоТа выполняет общие для клеток всех типов биологические функции, которые осуществляются им внутри клетки. К настоящему времени РгоТа обнаружен в организмах норвежской крысы . В организме прудовой лягушки . РгоТа 9, два транскрипционно активных гена РгоТа описаны в геноме рыбы Данио рерио . Ген РгоТа также идентифицирован в частично отссквенироваиных геномах орангутана . X.vi и когтистой шпорцевой лягушки X. Эти данные позволяют относить РгоТа к белкам позвоночных организмов. Тлимфотропого вируса человека типа 1 и 3 белок вируса ЭпштейнБарр . Установлено, что РгоТа принимает участие во множестве процессов жизнедеятельности клетки и всего организма. В данном обзоре будут рассмотрены внутриклеточные функции РгоТа, однако следует отметить, что для полноразмерного РгоТа описан также ряд функций вне клетки , . РгоТа белок с молекулярной массой порядка кДа, длина полипептидной цепи которого варьирует в пределах 41 а. В геноме человека описан один функциональный ген РгоТа, состоящий из пяти экзонов и локализованный на хромосоме 2 , . РгоТа , . ПрсмРЫК РгоТа человека претерпевает альтернативный сплайсинг, приводящий к образованию двух вариантов РгоТа изоформы 1 и изоформы 2. Более длинная изоформа 1 содержит один дополнительный аминокислотный остаток в позиции . В остальном она идентична более короткой изоформе 2 . Анализ соотношения двух альтернативных форм мРНК РгоТа показал, что в клетке одновременно присутствуют обе формы. При этом, независимо от типа клеток, более короткая форма является преобладающей и ее количество приблизительно в 9 раз больше количества более длинной . В нашей работе был использован преобладающий вариант РгоТа человека изоформа 2. Его аминокислотный состав представлен в Таблице 1, аминокислотная последовательность на Рисунке 1.