Установление полной структуры липополисахаридов бактерии Pseudomonas aeruginosa

• Автор: Быстрова, Ольга Витальевна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 156 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2.1. Общее строение липополисахаридов грмотрицатсльных бактерий

2.2. Строение области кора липополисахаридов грамотрицатсльных бактерий.

2.2.1. Семейство

2.2.1.1. Род

2.2.2. Семейство ii

2.2.2.1. Род

2.2.3. Семейство

2.2.3.1. Род
2.2.4. Семейство ii.
2.2.4.1. Род ii
2.2.5. Семейство i
2.2.5.1. Род i
2.2.6. Семейство
2.2.6.1. Род
2.2.7. Семейство i.
2.2.7.1. Род i
2.2.8. Семейство i
2.2.8.1. Род i
2.2.8.2. Род ii
2.2.8.3. Род ii
2.2.8.4. Род ша
2.2.8.5. Рол i
2.2.8.6. Род
2.2.8.7. Род i
2.2.8.8. Род
2.2.8.9. i
2.2.8 Род i
2.2.8 Род ii
2.2.9. Семейство i.
2.2.9.1. Род i
2.2 Семейство ii
2.21. Род i
2.2 Семейство i
2.21. Род i
2.2 Семейство x.
2.21. Род i
2.22. Род x
2.2 Семейство ii.
2.21. Род ii
2.2 Семейство
2.21. Род i
2.22. Род ii
2.23. Род ii
2.2 Семейство .
2.21. Род 3
2.2 Семейство ii.
2.21. Род i
2.22. Род ii
2.23. Род iii
2.2 Семейство Vii.
2.21. Род Vii
2.3. Заключение.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Серологическая классификация i
3.2. Общие подходы к структурному анализу липополисахаридов.
3.2.1. Выделение ЛПС.
3.2.2. Методы химической деградации ЛПС.
3.2.3. Химические методы анализа.
3.2.4. Массспсктрометрия
3.2.5. Спектроскопия ЯМР.
3.3. Структурное исследование ЛПС . i
3.3.1. Клинический изолят
3.3.2. Серогруппа 0.
3.3.3. Серогруппа 0.
3.3.4. Серогруппа 06
3.3.5. Ссрогруппа 0.
3.3.6. Серогруппа 01
3.3.7. Серогруппа 07
3.3.8. Серогруппа 09
3.3.9. Серогруппа 04
3.3 Серогруппа 0
3.3 Серогруппа 03.
3.3 Серогруппа 02.
3.3 Серогруппы 0 и 0
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
5.1. Выращивание бактериальной массы.
5.2. Выделение липополисахаридов.
5.3. Жесткая щелочная деградация ЛПС.
5.4. Мягкий кислотный гидролиз ЛПС
5.5. Определение моносахаридного состава
5.6. Определение состава аминокомпонентов.
5.7. Хроматографические методы
5.8. Массспектрометрия.
5.9. Спектроскопия ЯМР
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Полная молекула ЛПС содержит гидрофобную часть
липид Л, к которой через олигосахарид, называемый кором, присоединяется Оантигенный полисахарид рис. Эта, так называемая, форма ЛПС от английского слова гладкий, характерна для большинства встречающихся в природе диких штаммов бактерий, образующих колонии гладкой формы. Микроорганизмы, дающие колонии шероховатой формы, являются природными или искусственно полученными мутантами от слова шероховатый, продуцирующими молекулы ЛПС, лишенные полисахаридной цепи. Форма ЛГС характерна для диких штаммов таких патогенных для человека бакгерий, как ii iiii, ii , i i и i. Кроме того, существует, так называемая, форма ЛС, в которой Оантиген представлен одним повторяющимся звеном рис. О остаток моносахарида Р фосфат ЧЧЧЧЧЧч остаток жирной кислоты Рис. Схематическое строение липонолисахарида грамотринательных бакгерий. Липид А наиболее структурноконсервативная часть ЛПС. Он является своего рода якорем, закрепляющим молекулы ЛПС в мембране за счет гидрофобных взаимодействий друг с другом и с фосфолипидным слоем. Липид А ответственен за многие патофизиологические процессы, вызываемые ЛПС, в частности, за его эндотоксические свойства летальная токсичность, пирогенность, способность индуцировать провоспалитсльныс цитокины и др. Л . Гидроксильная группа в положении 6 остатка С1сЫ II служит местом присоединения олигосахарида кора. В обоих остатках глюкозамина к гидроксильным группам в положениях 3 и аминогруппам в положениях 2 присоединяются остатки различных жирных кислот. Рис. Строение дисахаридной основы липида А. Кор различных микроорганизмов имеет более разнообразное строение по сравнению с липидом А и включает как консервативные, так и вариабельные компоненты. Он представляет собой олигосахарид, включающий до и более моносахаридов. Са2 и М2 с образованием ионных мостиков. Кор существенно влияет на проявление биологической активности липида А в частности, он определяет подвижность углеводородных цепей жирных кислот, позволяя липиду А принимать биологически активную конформацию . Оантигенный полисахарид является периферийной областью молекулы ЛПС, которая может отстоять от поверхности клетки на расстояние нм. Обычно Оантиген это гетерополисахарид, построенный из повторяющихся звеньев, содержащих от двух до шести моносахаридных остатков. На иммуносиецифичности Оантигенов основывается внутривидовая серологическая классификация бактерий. В таких классификационных схемах Оантигены различных серогрупп заметно отличаются составом и строением, тогда как внутри каждой серогрупиы, при необходимости разделяемой на подгруппы, Оантигены имеют одинаковое или очень схожее строение. Биосинтез ЛПС происходит в несколько этапов . Оцепей, биосинтез которых проходит по блочному механизму. Полимеризация повторяющегося звена с последующим связыванием синтезированного Ополисахарида с коромлипидом А осуществляется после транслокации на внешнюю сторону цитоплазматической мембраны. Для гомополисахаридных Оцепей известен альтернативный механизм биосинтеза, по которому наращивание полисахаридной цепи происходит на внутренней стороне цитоплазматической мембраны путем последовательного переноса одного моносахарида за другим с последующей транспортировкой через мембрану готовой полимерной цепи. Структурные варианты кора различных бактерий заметно более ограничены по сравнению со структурами Ополисахаридов. В частности, в коре всех бактерий присутствует 3дезокси0лшнноокт2улозоновая кислота , рис. А. У большинства бактерий кор содержит несколько остатков Ьглицероиманногсптозы Нер, рис. С, два из которых образуют олигосахарид 315 с остатком 1, замещенным в положение 4 остатком или фосфатной группой. Вместо остатка 1 у бактерий i или у бактерий i, i и ii может присутствовать стереохимически сходный моносахарид 0А7Шеро0тл7оокт2улозоновая кислота Ко, рис. В . Кор некоторых бактерий содержит ОглицероОманногсптозу Нер, рис. Нер . В ЛПС i i и i i 2 или а13связанные остатки Нер образуют гептагликановые цепи, биологическая роль которых неизвестна. В Рис. Нер, С и Ъглицсроон лшшогентозы Нер, .