Изучение взаимодействия структурных и пространственных аналогов эстрадиола с рецепторной системой матки

• Автор: Черняев, Геннадий Алексеевич
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 172 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. ЭСТРАДИОЛЬНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ ШЕКОПИТАЩИХ.

Глава I. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ЭСТРАДИОЛА В ОРГАНИЗМЕ

Глава П. СВОЙСТВА ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОГО РЕЦЕПТОРА МАТКИ .

П.. Физикохимические свойства рецептора

и его очистка. II

П.2. Сродство эстрадиола к рецептору

и способы его определения .

П.5. Кинетические и термодинамические параметры

связывания эстрадиола с рецептором

ПЛ. Специфичность эстрадиолрецепторного
взаимодействия
Глава И. ЭСТРАДИОЛЬНЫЙ РЕЦЕПТОР ЯДЕР МАТКИ
Ш.. Двухстадийная модель действия эстрогенов .
Ш.2. Активация и трансформация цитосольного рецептора Ш.З. Транслокация эстрадиолрецепторного комплекса
в ядро
Л. Локализация рецептора в ядре матки .
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
I. СВЯЗЫВАНИЕ СТЕРОИДОВ С ЭСТРАДИОЛЬНЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ
ЦИТОПЛАЗМЫ И ЯДЕР МАТКИ .
1.1. Параметры связывания эстрадиола
1.2. Зависимость рецепторного связывания эстрогенных стероидов от их структуры .
а Способы определения конкурентной способности
б Сравнение специфичности связывания с цитосольныы
и ядерным рецепторами .
в Свойства цитосольного рецептора матки разных животных
г Сравнение рецепторного связывания и эстрогенной активности аналогов эстрадиола
д Изучение температурной зависимости связывания стероидов с цитосольным рецептором
П. ЯДЕРНАЯ ТРАНСЛОКАЦИЯ АНАЛОГОВ ЭСТРАДИОЛА
В БЕСКЛЕТОЧНОЙ СИСТЕМЕ .
П.. Изучение специфичности переноса стероидов
в ядра матки .
П.2. Специфичность цитоплазматического рецептора
при переносе стероидов
Ш. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СРОДСТВА СТЕРОИДРЕЦЕПТОРНЫХ КОМПЛЕКСОВ
К ЯДРАМ .
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ВЫВОДЫ .
ЛИТЕРАТУРА


Так, при инкубации целой матки с 3Н эстрадиолом в присутствии различных соединений ртути, блокирующих группы, нарушалось включение гормона в ткань. В опытах с цитосолом присутствие меркуриатов иодацетамид, этилыалеимяд, поксимеркурибензоат, пхлормеркурибензоат также препятствовало связыванию 3Н эстрадиола с рецептором, а добавление этих ингибиторов к цитосолу после связывания гормона приводило к разрушению образовавшихся комплексов , , , . Рецепторы чувствительны также к металлам, присутствующим в среде, причем чувствительность рецепторов матки зависит от источника ткани. Связывание эстрадиола в цитосоле телки увеличивалось более чем в 2 раза в присутствии 5 мМ I и повышалось при добавлении солей других металлов в концентрации 5ыМ. К на , 2 на , Ми2 на . I2 мМ на , I2 мМ на , I2 ЮПИ на , I ЗООмМ. I ыМ ЗДТА . Двухвалентные металлы I5. Н эстрадиола в цитосоле эндометрия. Сопоставление этих данных позволяет думать, что свойства рецепторов одного я того же гормона эстрадиола, находящихся в од
ном и том не целевом органе матке, неодинаковы у разных видов организмов. Другими словами, возмоиность так называемой видовой специфичности рецепторов эстрадаола и вообще стероидных гормонов весьма вероятна. Простая картина о существовании в клеткемишени некой определенной молекулы белка, служащей рецептором стероидного гормона, с существовала недолго. Вскоре после того как было установлено присутствие в цитосоле матки эстрадиолрецепторного комплекса, обнаруживаемого центрифугированием в градиенте плотности сахарозы, стало известно, что коэффициент седиментации изменяется при увеличении ионной силы среды. При добавлении КС в концентрации 5 0,ЗМ появлялся новый пик, соответствовавший меньшему значению 2 , и одновременно исчезал более тяжелый. Впервые это наблюдение сделал Эрдо для цитосола матки телки , затем Коренман и Болье для матки крысы. Подобные результаты были получены и при гельфильтрации цитосола матки. Таким образом, стало ясно, что эстрадиольный рецептор не представляет собой одну полипептидную цепь, а есть более сложное образование, способное находиться в виде агрегата из субъединиц. Подробные исследования показали, что превращение 8 4 происходят как в присутствии эстрадиола, так и без гормона при этом превращении эстрадяол не переносится с одного белка на другой при удалении 4 форма вновь превращается в 8 форму, то есть было установлено явление обратимой диссоциации рецептора 8 i4 , , . Если же
определение проводилось при ионной силе близкой к физиологической 0, М I, то появлялась субъединица с константой седиментации 6 Это указывало на более сложные связи между субъединицами эстрадиольного рецептора матки. Интересный эксперимент был проведен Рети и Эрдо , которые не гомогенизировали ткань в буферной среде, а центрифугировали матку целиком, выдавливали, так сказать, натуральный сок ткани. Исследование полученного экстракта центрифугированием в градиенте плотности сахарозы приготовленном на таком же, но депротеинизированном соке обнаружило присутствие только 6 формы. Это дало основание одно время считать 6 форму физиологической, присутствующей в клетках матки i viv Эта форма наблюдалась также после экстракции целой ткани буфером, содержавшем 0,4 М I, и даже при центрифугировании в высокосолевом градиенте цитосола, полученного в условиях низкой ионной силы . Большое многообразие и сложность взаимопревращений форм эстрадиольного рецептора цитосола матки крысы покзало исследование, проведенное группой Горски . Скорость седиментации эстрадиолрецепторного комплекса в градиенте плотности сахарозы зависела не только от ионной силы среды, но и от концентрации цитосола. Авторы высказали предположение, что нативная полипептидная единица эстрадиольного рецептора способна связываться с другими белками цитосола и поэтому увеличение концентрации цитосола приводит к появлению более крупных единиц. М I и 3,85,2 для 0,4 М I. Выводом из этой работы может быть требование соблюдения осторожности при интерпретации данных по седиментации и необходимость тщательного контроля условий проведения эксперимента.