Некоторые свойства и специфичность Ca,Mg-зависимой ДНКазы из эмбрионов морского ежа Strongylocentrotus intermedius

• Автор: Мензорова, Наталья Ильинична
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 147 c. : ил

ВВЕДЕНИЕ.
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. МЕТАЛЛОЗАВИСИШЕ ДНКАЗЫ ЭУКАРИОТ . . . ГЛАВА I. РАСПРОСТРАНННОСТЬ И ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

МЕТАЛЛОЗАВИСИШХ ДНКАЗ.

1. Классификация ДНКаз

2. Распространнность металлозависимых ДНКаз . . . .

3. Молекулярная масса и субъединичность металлозависимых ДНКаз .

4. Изоэлектрическая точка, изоформы металлозависимых ДНКаз . . . .

5. Первичная структура и активный центр металлозависимых ДНКаз .

6. Влияние среды и температуры на активность металлозависимых ДНКаз

7. Активаторы металлозависимых ДНКаз

8. Ингибиторы металлозависимых ДНКаз

ГЛАВА П. СПЕЦИФИЧНОСТЬ ДЕЙСТВИЯ МЕТАЛЛОЗАВИСИШХ ДНКАЗ . .
1. Величина продуктов гидролиза .
2. Механизм гидролиза ДНК металлозависимыми ДНКазами
3. Конформация ДНК субстрата
4. Специфичность металлозависимых ДНКаз к химической природе оснований субстрата . .
5. Специфичность металлозависимых ДНКаз к пространственной структуре субстрата
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ . .
ГЛАВА Ш. ВЫДЕЛЕНИЕ И НЕКОТОРЫЕ ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
Са.Ме ЗАВИСИМОЙ ДНКАЗЫ.
1. Выделение Са,М зависимой ДНКазы .
2. Характеристика физикохимических свойств Са,Мзависимой ДНКазы.
ГЛАВА 1У.ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ Са,М ЗАВИСИМОЙ ДНКАЗЫ
К ПЕРВИЧНОЙ И ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРАМ СУБСТРАТА . .
ГЛАВА У. ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ Са.Ыв ЗАВИСИМОЙ
ДНКАЗЫ К ЛОКАЛЬНЫМ ВАРИАЦИЯМ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ СУБСТРАТА
1. Действие Са, зависимой ДНКазы на двухцепочечные полидезоксирибонуклеотиды .
2. Действие Са, зависимой ДНКазы на членный фрагмент ДНК
3. Действие Са,Ма зависимой ДНКазы на синтетиче
. ские ГОКДНК и РНК РНК комплексы.
4. Влияние высокой ионной силы раствора на субстратную специфичность Са, зависимой ДНКазы
5. Заключение НО
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ . ИЗ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


В соответствии с этим критерием выделяется три группы ферментов ДНКазы, обладающие строгой специфичностью к определенной нуклеотидной последовательности ДНКазы, предпочитающие те или иные межнуклеотидные связи и ДНКазы не обладающие специфичностью к природе оснований. По специфичности ко вторичной структуре субстрата ДНКазы делятся на три группы гидролизующие только двухцепочечные ДНК, гидролизующие только одноцепочечные ДНК и не обладающие специфичностью ко вторичной структуре. Способность ДНКаз атаковать собственную ДНК. По механизму эндонуклеолитического расщепления двухцепочечного субстрата ДНКазы делятся на два типа. Ферменты с одноударным механизмом действия расщепляют обе нити ДНК в одном и том же месте. Ферменты с двуударным механизмом расщепляют одну нить в разных участках ДНК таким образом, что двухцепочечная макромолекула разрывается только после совпадения двух одноцепочечных разрывов. Такая классификация в значительной мере облегчает систематизацию и обобщение имеющихся сведений о свойствах и специфичности ДНКаз. Эукариотические металлозависимые ДНКазы, согласно критериям Ласковского, способны гидролизовать ДНК в слабощелочной среде в присутствии ионов двухвалентных металлов по эндонуклеазному типу, образуя олигонуклеотиды с фосфатом на 5конце. Эти ферменты осуществляют разрыв двухцепочечной ДНК по двуударному механизму и
способны гидролизовать синтетические и природные субстраты, в том числе и собственную ДНК. Са Щ , причем эти два катиона проявляют синергический активирующий эффект. Как правило, молекулярная масса этих ДНКаз составляет кД а изоэлектрическая точка находится в слабокислой области . Са,1 Эндонуклеазы достаточно четко делятся на 2 группы по влиянию на молекулу белка эн реагентов, мономерного а актина из мышц кролика и ДНКсвязывающих основных белков 5. Одна группа ферментов, идентифицированная в ядрах различных клеток и активирующая ДНКсинтезирующую систему, ингибируется ЭНреагентами, не ингибируется о актином и, в некоторых случаях, активируется основными белками 5. Другая группа ферментов типа панкреатической ДНКазы I устойчива к действию ЭН реагентов, ингибируется б актином и не активируется основными белками . В литературном обзоре приведены сведения о свойствах металлозависимых щелочных эндодезоксирибонуклеазах, гидролизующих природные и синтетические, но не модифицированные субстраты. Особое внимание уделено рассмотрению влияния пространственной структуры субстрата на специфичность ферментов. Имеющиеся данные свидетельствуют об участии этих ферментов в синтезе ДНК и различных генетических процессах 6, 8, II, . Интерес к этим ферментам особенно возрос в связи с тем, что за последние дватри года появились принципиально новые подходы в объяснении специфичности металлозависимых ДНКаз , . Они позволяют углубить наше по
нимание взаимосвязи между тонкой пространственной струтурой сложных биополимеров и специфичностью действия ферментов. Металлозависимые ДНКазы обнаружены в клетках млекопитающих 5, б, 9, , , птиц , , амфибий , рыб , насекомых , членистоногих , головоногих моллюсков , иглокожих 8, , простейших эукариотах , а также в растениях . ДНКазы такого типа встречаются в различных тканях и клетках организма в печени 6, 7, II, , , , , почках , тимусе 6, 9, , , селезнке , поджелудочной и околоушной железах , , эпидермисе , мозге , семенниках Ц, , семенной плазме 5, лимфоцитах и плазме крови , , , малигнизированных клетках меланомы , и КВ . В последнее время ведтся интенсивное изучение ДНКаз, индуцированных вирусами. По биохимическим и иммунологическим свойствам эти ферменты отличаются от соответствующих ДНКаз из неинфицированных клеток , . Вирус птичьего миелобластоза индуцирует ДНКазную активность, обнаруженную у белка р, связанного с нуклеиновой кислотой V . Выделены две ДНКазы, индуцируемые вирусом герпеса V . В лимфобластоидных клетках человека обнаружены ферменты, индуцированные вирусами i V и V . ДНКазы I из поджелудочной железы быка, околоушной железы быка и крысы по иммуноцитохимическим данным локализованы в секреторных гранулах экзокринной части желез .