Установление строения липополисахаридов бактерий рода Proteus

• Автор: Кондакова, Анна Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 167 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР..

2.1 Спектроскопия ядерного магнитного резонанса ,.

2.1.1 Физические основы ЯМРспектроскопии

2.1.2 Современная спектроскопия ЯМР в исследовании бактериальных углеводов .

2.2 Массспектрометрия

2.2.1 Номенклатура разрывов связей в олигосахаридах ..

2.2.2 Типы анализаторов, используемые в современных массспектрометрах

2.2.3 Массспектрометрия с ионизацией бомбардировкой быстрыми атомами

2.2.4 Массспектрометрия с ионизацией лазерной десорбцией из матрицы
2.2.5 Массспектрометрия с ионизацией электрораспылением.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Установление строения Ополисахаридов бактерий рода
3.1.1 Полисахариды, содержащие гексуроновые и нонулозоновую кислоты
3.1.1.1 iii ...
3.1.1.2 vi 7.
3.1.1.3 iii 0.
3.1.1.4 vi 5. .
3.1.1.5 vi 9
3.1.2 Полисахариды, содержащие фосфатные группы
3.1.2.1 i 9 .
3.1.2.2 i 8 .
3.1.2.3 i i 0...
3.1.2.4 iii 8. .
3.1.3 Полисахариды, содержащие остатки неуглеводных органических кислот.
3.1.3.1 ii ... 7
3.1.3.2 ii 9. . .
3.1.3.3 ii 8..
3.1.3.4 i 1
3.1.3.5 xi 0.
3.1.4 Нейтральные полисахариды ..
3.1.4.1 ii 0. ...
3.1.5 Значение данных о строении Ополисахаридов для классификации
3.2 Установление строения кора ЛПС бактерий рода
3.2.1 Подготовка образцов и выбор метода исследования .
3.2.2 IIмассспектры с регистрацией катионов и анионов..
3.2.2 Эксперимент I с регистрацией отрицательно анонов
3.2.3 массспсктрометрия с регистрацией катионов.
3.2.4 Установление полной структуры олигосахаридов кора. .
3.2.5 Обсуждение результатов структурного исследования кора . I
4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
4.1 Бактериальные штаммы, выращивание бактерий и выделение ЛПС
4.2 Деградация липополи сахаридов.
4.2.1 Мягкий кислотный гидролиз.
4.2.2 ОДезацилирование .
4.2.3 Дезаминирование .
4.3 Химические модификации и избирательное расщепление
4.3.1 ОДез ацетил ирование . .
4.3.2 Дефосфорилирование ..
4.3.3 Восстановление карбоксильных групп ..
4.3.4 Сольволиз безводным фтористым водородом .
4.3.5 Сольволиз трифтормстансульфокислотой..
4.3.6 Парциальный кислотный гидролиз ..
4.3.7 Дезаминирование .
4.4 Определение состава полисахаридов
4.4.1. Ионообменная хроматография И11МмимчнммЧ1МЧМНИими1тнтиии
4.4.2 Газожидкостная хроматография
4.5 Определение абсолютных конфигураций компонентов
4.6 Анализ методом метилирования
4.7 Инструментальные методы анализа
4.7.1 Массспектрометрия..
4.7.3 Спектроскопия ЯМР.
5. ВЫВОДЫ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ГЖХМС летучих производных моносахаридов позволяет идентифицировать сахарные остатки и определять положения гликозилирования. ДО типа моносахаридов, например, гексоза, гептоза, гексозамин, гексуроновая кислота и т. ЯМРспектроскопию можно смело назвать основным методом установления строения сложных углеводов. Одной из главных причин широкого распространения этого метола является то, что практически все, как структурные, так и конфигурационные различия между компонентами олигосахаридов как моносахаридами, так и неуглеводными заместителями оказывают влияние на резонансную частоту ядер и следовательно отражаются в ЯМРспектрах. Более того, некоторые виды взаимодействий между моносахаридами также могут быть выявлены в ходе различных ЯМРэкспериментов, что позволяет получить информацию об их взаимном пространственном расположении. В основе спектроскопии ядерного магнитного резонанса лежит тот факт, что ряд ядер в частности, Н и ,3 обладают спином Уг, вследствие чего, находясь во внешнем магнитном поле, эти ядра прсцсссируют вокруг оси, направленной либо параллельно ему а, либо антипараллельно 3 и могут переходить из одного состояния в другое, поглощая или испуская волны определенной частоты. Эта частота определяется многими факторами, включая химическое окружение данного ядра, что и делает ЯМРспектроскопию столь удобным методом установления структуры химических соединений. Поскольку количество а и ядер неодинаково и определяется распределением Больцмана, то группа ядер обладает суммарным магнитным моментом Мо, поведение которого подчиняется законам классической механики. Изменение под действием облучения соотношения ядер с а и Рориентацией приводит к отклонению от положения равновесия. Возвращение системы в первоначальное состояние сопровождается выделением энергии, которое ослабевает по мере приближения к равновесию. Это явление, называемое спадом индуцированного сигнала СИС или Ii , I, регистрируется датчиком ЯМРспектрометра. Эти два понятия относятся к представлению в виде векторной модели процессов, происходящих в ядре под действием внешнего магнитного ПОЛЯ и радиочастотных импульсов рис. Рис. Лабораторная и вращающаяся системы координат . Во постоянное магнитное поле, вызывающее разницу в ориентации спинов. Различие между двумя способами представления состоит в положении наблюдателя относительно системы векторов. В лабораторной системе координат наблюдатель находится вне системы, в результате чего создается сложная картина, состоящая из множества прсцессирующих векторов. Во вращающейся системе координат внешнее магнитное поле В, отвечающее за резонанс спинов, раскладывается на два вектора, вращающиеся в плоскости ху в разные стороны с одинаковой скоростью. Система координат принимается вращающейся со скоростью одного из этих векторов, что позволяет существенно упростить модель. При фиксации системы координат на одном из векторов в новой, вращающейся, системе второй вектор, составляющий В, оказывается движущимся со скоростью в два раза быстрее остальных, и им можно пренебречь. Поскольку по условиям резонанса скорость прецессии ядерных спинов совпадает с частотой вращения одного из векторов В, то во вращающейся системе координат они оказываются замороженными. Физическим аналогом этого формального представления является способ регистрации 1 в ЯМРспектрометрах. Частота прецессии магнитного момента протонов может составлять несколько сотен МГц, в то время как разница между этими частотами для разных протонов одной молекулы обычно не превышает нескольких сотен Гц. Для облегчения оцифровки и уменьшения объема данных из измеренных в результате эксперимента частот вычитается рабочая частота спектрометра, т. Импульсом в спектроскопии ЯМР называется временное включение радиочастотного поля определенной амплитуды вдоль одной из осей вращающейся системы координат. Под его воздействием вектор Мо начинает смещаться в направлении, перпендикулярном направлению приложения поля, причем величина отклонения от первоначального положения определяется длительностью импульса, которая обычно и измеряется в градусах отклонения.