Синтез полимерных суспензий медико-биологического назначения

• Автор: Лобанов, Андрей Николаевич
• Шифр специальности: 02.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 142 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение.

Глава I. Литературный обзор.

1.1. Полимерные микросферы как носители биолигандов

для создания тестсистем.

1.2. Синтез полимерных суспензий методом затравочной полимеризации.

Глава II. Экспериментальная часть.

.1 Исходные вещества

.2 Методы исследования

Глава III. Результаты и их обсуждение.

1.1. Состояние проблемы по синтезу полимерных суспензий биомедицинского назначения

Ш.2. Синтез затравочных полистирольных частиц методом
полимеризации стирола в отсутствие эмульгатора
1.2.1. Проблемы удаления остаточного мономера из объема полимерных микросфер.
I.3. Загравочная полимеризация мономеров различной
природы
1.3.1. Рентгеноэлектронное исследование межфазного
слоя полимерных микросфер
1.4. Создание тестсистем на фибронектин.
1.5. Получение антительных диагностических тестсистем
Заключение.
Выводы.
Список литературы


В применении к РЛА эти два метода дают возможность количественного определения степени агглютинации по калибровочным кривым, полученных либо из данных по титрованию, либо из кинетических измерений. Таким образом, метод латексной агглютинации по чувствительности и специфичности превосходит многие классические серологические реакции и уступает иногда лишь методам третьего поколения, например, радиоиммунологическому исследованию. В то же время при тщательной отработке методики получения латексных диагностикумов, соблюдении оптимальных условий их приготовления и постановки самой реакции метод латексной агглютинации по чувствительности и специфичности может приближаться к самым современным иммунологическим методам, в том числе радиоиммунологи , ческому и иммуноферментному . Так, например, растворимый поверхностный антиген гепатита В НВзА и чумного микроба выявляется в конечной концентрации до 4 текограмм мл, возбудители чумы и бруцеллеза могут быть обнаружены при концентрации до 3 микрочастицмл. В то же время РЛА значительно проще в постановке, не требует какойлибо специальной аппаратуры и высококвалифицированных специалистов. Особенно полезен этот метод при проведении массовых обследований. Однако в агглютинационных тестах может наблюдаться неспецифическая агглютинация, для устранения которой иногда необходима специальная обработка тестируемых сывороток. Для создания тестсистем используются частицы полимерных суспензий, как содержащие, так и не содержащие на своей поверхности функциональные группы. В литературе содержится большое количество публикаций, касающихся исследования условий иммобилизации белков путем их физической адсорбции на поверхность полимерных микросфер . Технология получения диагностических препаратов с использованием полимерных микросфер с физически адсорбированными на их поверхность белками легко осуществима. Однако, ряд серьезных недостатков, среди которых следует выделить возможную десорбцию белка с поверхности полимерных частиц при изменении состава или реакционной системы в процессе получения диагностикума , и ограниченную подвижность молекул белка в пространстве требуют существен нот ее совершенствования. Это обусловлено и тем, что нежелательные характеристики тестсистем обуславливают их невысокую диагностическую эффективность и недостаточное время хранения. Поэтому в последние годы в иммунодиагностике, использующей РЛА, все более широкое применение находят полимерные носители с ковалентно иммобилизованными белками на их поверхности . Однако, в первую очередь он определяется природой полимера и функциональных групп, находящихся на поверхности полимерных частиц, способных непосредственно или после их активации связывать белок. От природы и концентрации функциональных групп на поверхности полимерных микросфср зависит и количество недеформированного белка, ковалентно связывающееся с полимерной поверхностью, которое, главным образом, определяет диагностическую эффективность тестсистем . Шиффово основание устойчиво при рН68 и гидролизуется за пределами этою диапазона. Полимерные микросферы, содержащие на поверхности другие функциональные группы, например, гидроксильные, карбоксильные, аминогруппы, требуют предварительной активации. Активацию поверхности полимерных частиц проводят в условиях, позволяющих сохранить активность антител и сводящих к минимуму агломерацию частиц. Подробно описанным в литературе , и часто применяющимся на практике методом активации карбоксильных групп является карбодиимидный метод, основанный на реакции карбоксильных групп с растворимым в воде карбодиимидом КДИ и последующем взаимодействии с белком рис. СОС т2Белок 1,СМНБелок РМНСМНР
Рис. Активация карбоксильных 1рупп. Обычно используют такие водорастворимые карбодиимиды, как 1циклогексил 32морфолинопропилкарбодии. После активации карбоксильных групп карбодиимидом избыток последнего удаляется прежде, чем будет добавлен белок. Это предотвращает межи внутримолекулярное взаимодействие белка с КДИ. I
Активация гидроксильных групп цианобромидным методом основана на реакции гидроксильных групп полимерных частиц с цианобромидом при щелочных значениях .