Карбоксилсодержащие полимерные микросферы для изучения трехмерного строения сосудистого русла экспериментальных животных

• Автор: Левшенко, Елена Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.06, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Использование полимерных микросфер в биотехнологии.

1.2 Методы изучения строения сосудов

1.3. Методы окрашивание полимерных микросфер флуоресцентными

красителями.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Исходные вещества.

Методы исследования.

2.1. Дилатометрический метод исследования кинетики полимеризации

2.2 Проведение затравочной полимеризации
2.3. Измерение межфазного натяжения на границе раздела фаз
2.4. Определение молекулярных масс полимеров
2.5. Определение размера частиц в суспензии.
2.6. Определение сухого остатка суспензии.
2.7. Подбор концентрации красителя
2.8. Определение агрегативной устойчивости микросфер
2.9. Окрашивание ПММА и ПС микросфер
2 Перфузия
2 Просветление препаратов.
2 Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Синтез лолистиролметакриловых суспензий
3.2. Синтез карбоксилсодержащих полистирольных суспензий
3.3. Синтез карбоксилсодержащих полиметилметакрилатных суспензий
3.4. Синтез карбоксилсодержащих полистирольных суспензий методом затравочной полимеризации.
3.5. Разработка метода анализа трехмерной организации сосудистого русла с
помощью полимерных микросфср
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Полимерные микросферы находят широкое применение в биологии и медицине в качестве носителей биолигандов при создании диагностических тестсистем, работающих по принципу реакции латексной агглютинации в качестве меток при сепарации биологических объектов в качестве носителей в клеточной технологии и для доставки лекарственных средств в качестве маркеров клеток и клеточных поверхностных антигенов при микроскопических исследованиях 1. Для создания диагностических тестсистем, работающих по принципу реакции агглютинации, изначально в качестве носителей специфических биолигандов антител, антигенов использовали простые клетки крови эритроциты 25. Со временем было освоено промышленное производство эритроцитарных диагностических тестсистем, используемых в реакции непрямой гемагглютинации РНГА. Хотя разработанные диагностические тестсистемы и удовлетворяли исследователей чувствительностью РНГА, недостатком их являлось то, что эритроциты не инертны, так как, помимо иммобилизованного специфического биолиганда, на их поверхности имеются собственные биологически активные вещества белки, рецепторы и т. РНГА спонтанная агглютинация. Вместе с тем воспроизводимость результатов РНГА ограничивалась кратковременной пригодностью эритроцитов и зависимостью многих свойств эритроцитов данного вида животных от пола донора, сезона года и т. Эритроциты трудно поддаются контролю, недостаточно однородны по размеру, присоединение биолиганда к эритроцитам обычно осуществляется путем физической адсорбции биолиганда на их поверхность. Со временем эритроцитарные носители были заменены на синтетические объекты, среди которых наиболее перспективными оказались полимерные микросферы. Первое сообщение об успешном применении поливинилтолуольных и полистирольных микросфер с узким распределением частиц по размерам в качестве носителей белков в диагностической тестсистеме на ревматоидный артрит появилось в году 6, 7. Сообщалось, что взаимодействие аутоантител иммуноглобулина М М к Рсфрагменту иммуноглобулина в 1С ревматоидный фактор, с М, адсорбированным на поверхности частиц суспензии, привело к их агглютинации с образованием крупных агломератов, находящихся в сыворотке крови пациента, легко различимых невооруженным глазом. Вслед за этим появились публикации по использованию частиц полистирольных и полиметилметакрилатных суспензий при создании диагностических тестсистем на другие типы заболеваний 8, . Однако кажущаяся на первый взгляд простота перехода от биологических носителей эритроцитов к синтетическим полимерные микросферы в реальности не подтвердилась. Оказалось, что удачные лабораторные разработки диагностических тестсистем полимерная микросфера биолиганд часто не могли быть воспроизведены. Многие авторы ориентировались на универсальность полимерного носителя и возможность его использования при создании любой тестсистемы. Однако проявилось существенное влияние природы поверхности полимера на иммобилизацию биолигандов, устойчивость полимерных частиц при конструировании диагностических тестсистем и т. Все это является причиной того, что методы эмпирического поиска полимерных частиц и способов иммобилизации биолигантов на их поверхность, т. К настоящему времени сформулированы общие требования, предъявляемые к полимерным микросферам, используемым при разработке диагностических тестсистем. Проблема синтеза функциональных полимерных микросфер различного диаметра с узким РЧР остается одним из основных направлений развития гетерофазной полимеризации , . Получение функциональных частиц с диаметром в интервале 0,2 мкм и узким РЧР, устойчивых в растворе электролита и при хранении в лабораторных условиях осуществляют разными способами эмульсионной, суспензионной, дисперсионной, осадительной и затравочной полимеризациями . Выбор метода синтеза определяется, в первую очередь, требованиями к диаметру частиц и строению их межфазных адсорбционных слоев. Так, частицы с диаметром до 0,2 мкм получают эмульсионной полимеризацией мономеров, со средним диаметром до 3 мкм полимеризацией мономеров в отсутствие эмульгатора, в присутствии нерастворимых в воде ПАВ, со средним диаметром от 1,5 мкм и выше до мкм суспензионной, осадительной и затравочной полимеризацией.