Определение витаминов и коэнзимов Q9 и Q10 в объектах со сложной матрицей методом жидкостной хроматографии

• Автор: Бендрышев, Александр Александрович
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 232 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

ГЛАВА I. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ

1.1 КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВИ I АМИНОВ

Витамин В,
2 Витамин В
3 Витамин В
4 Витамин В

5 Витамин В6

6 Витамин Вл IО

7 Витамин Ву
8 Витамин В л II
1 1 9 Витамин С
1.2 Мы ОДЫ ОПРРДЕЛСПИЯНОДОРАСТВОРИММХ витаминов
1 Капипярный электрофорез и лекшрокинетическая хроматография
2 Тонкосзойиая и бумажная хроматогхгфия
3 Газовая хроматография
4 Высокоэффективная жидкостная хроматография со спектрофотомстрнчсским.
флуоресцентным и эчсктрохимичсским детектированием
5 Определение водорастворимых витаминов методом ВЭЖХМС
1.3 ОСОЫ.НПОСТИ ПРОБОПОД ОТОВКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ви I АМИНОВ.
ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ
2 1 Краткая характеристика аирорас гворимых витаминов и их биологического л иствия
1 Витамин А и ретиноиды
2 Витамин Е и его производные
2 Витамины 2 и
2.2 Методы определения жигорастворимых ви аминов.
2 2 1 Спектрофото.мстрические методы
2 2 2 Другие иехроматографические методы определения жирорастворимых витаминов
2 2 2 Хроматографические методы
2 2 3 Хроматографические методы опедееиия индивидуазьных жирорастворимых витаминов и
их форм
2 2 4 Музьтивитаминныи апазиз
2.3 ОСОНОСТИ ПРОЦЕДУР ПГОГЮПОДГОТОНКН. ИСПОЛЬЗУЕМЫМРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ АИРОРАСIВОРИМЫХ
ви аминов.
2 3 1 1робоподготовка с использованием сипонифнкации
2 3 2 Окстракцш
ГЛАВА 3. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЭИЗИМОВ о
3.1 Краткая характеристика уьихиионов и их своисва .
3.2 м юлы определения кол пимов
3 2 1 Электрохимические методы .
3 2 2 Спек трофото метрические методы
3 2 3 Хроматографические методы со спектрпфотометрическпм и эзсктрохимическим
детектированием
3 2 4 Определениеубихинопов методом жидкостной хроматографии с массспектрометрическим
детектированием .
3.3 Способы птою подготовки биоло ичрских объектов при определении коэпзимов .
ГЛАВА 4. ИСХОДНЫЕ ВЕЩЕСТВА, АППАРАТУРА, МЕТОДИКИ ЭКСПЕРИМЕНТА .
4 I ИСХОДНЫ1 активы и рас воры.
4.2 Аппаратура сорбеигы к н подвижны г. фазы
4.3 Профподготовка образцов.
4 3 1 Водорастворимые витамины
4 3 2 Жирорастворимые витамины
4 3 3 Коэтимы О, и ,.
4.4 Методика хромато рафического оксперимьита
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ .
ГЛАВА 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ.
5.1 ВЫЬОРУСЛОВИИ ХРОМА О РАФИЧРСКООРЛЗДЕЛГНИЯ ВИТАМИНОВ. I б
5 1 Разделение витаминов с использованием фосфатных буферных растворов в качестве
элюента
5.2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОДОРАСIВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ С млссс Елективним ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ .
Выбор неподвижной фазы
5 2 2 Выбор подвижной фазы и профиля градиентного элюирования
5 2 3 Выбор условий массспсктромстричсского детектирования витаминов
5 2 4 Метрочогическне характеристики хролшто шссспектроетрического определения
витаминов
5 2 5 Оптимизация градиентного ре жима оптирования
5.3 Применение предложенного подхода к анализу реальных оьы ктов
ГЛАВА 6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ .
6.1 Выбор условий хроматографическо о разделения
1 Разделение жирорастворимых витаминов в изократическом режиме
6 Разделение жирорастворимых випиминов в градиентном режиме
6.2 Оптимизация способов пробоподго овки
Зерновые витаминные бленды, корма
6 2 2 Определение витаминов А, I, и Г в биологически активной добавке А лфавит, витаминных блендах и фармацевтических препаратах
6 2 3 Опреде ение витаминов в молочных смесях и йогуртах гуиш
6 2 4 Сравнение предложенных способов пробоподготовки
6.3 ДРУ ИЬ ВАРИАНТЫ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИ АМН ОВ.
6 3 1 Флуориметрическос детектирование жирорастворимых витаминов
6 3 2 Электрохимическое детектирование жирорастворимых витаминов
6 3 3 Массспектрометрическое детектирование жирорастворимых витаминов
ГЛАВА 7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЭНЗИМОВ О, И 0,0
7.1 Получение восс ановльннои формы коэнзимов
7.2 О ГИМИЗА1ИЯ УСЛОВИИ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ .
7.3 Выбор условий массспектрометрического детектирования
7.4 ОПТИМИЗАЦИЯ ПРОЦЕДУРЫ НРОЬОПОДОГОВКИ РЕАЛЬНЫХ ОЬРКЮВ.
7.5 ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕДЛОЖЕННОГО ПОДХОДА ПРИ АНАЛИЗЕ РЕАЛЬНЫХ ОБЪЕКТОВ.
выводы. НКИЧМИИШИИШИНИИММММИЧИИНИИЖ4МШЧММИМХ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Обогащенная ПАЛО Рибофлавин люмихром Кислотный гидролиз Ан склав. НС 1С. Ох, цеитриф. Рссуснсндиронанис 0. I. ii д 0 ж 3. С1. Рибофлавин Ферчешатинный ГЯДроПЮ. Осаждение ТХУ. ТФЭ Ы. X v Июкратмчеекмй режим. МеОН. АсОН. Моча Ричих i. ЦсН7риф. С,л ЗАО ж 3. ИвократичеекмИ режим. II, Гкцропжж II. Анализируемый объект Определяемый компонент робо1юдгогойка Колонка Параметры разделения Элюсит Детектирование Лит. Говяжья печень, фруктовые соки, пивные дрожжи. Никотиновая кислота Кислотный и щелочной гнлролш 0. Н I, водяная бани 1 ч. Охл. Автоклав, и . I, 1 ч. Охл доведение до 4. К Дгрпкн тщании лослс колоночная. Изо критический режим. М vi, 0. Моча Никотннлмил Т вердофлтная экстракция СГД 0 х 4 мм Иэократкчесхип режим, диохтисульфосукцннат Н0МсОН 4. Варенье сосиски Никотиновая кислота, иикотииамид Гомогенизация с водой, поведение до метки. Осаждение белков нас и III . До метки во. Мтократичсскин режим. Колонка Элюесп Детектирование I. Свиная печень, мясо, рыба. Экстракции сики нашо новой кисло ы ьсрхиваие С 2С0мМ трмсбуфером 8. Экстракции пантотсмопой кислоты инкуб, с буферизованным пепсином 4. С. 3 ч. Добавление 0. М трис буфера 8. Инкуб. С. I ч. До метки водой, кенгриф фильтр. Очистка экстрактов ТФЭ сильными катионо и анионообменниками. Дермвапиишы тюслсколоночия. НМ КГ 1 х 5 мм 5 мкм Иератический режим. МсОН. ЗЗмМ фосфатный буферный реет вор 2. Детское питание Гомогенизация в воле. С, охл сбрзботка АсОН и . См 1 х 4. Июкратический режим. Таблица 6 ВЭЖХ методы определения витамина В,. Анализируемый объект Определяемый компонент робоюдго топка Параметры разделения Лит. Свиная печень, овощная смесь, пшеничная мука Пиридокенн. Автокгдтв. Н НС ФС чин. Доведение до 4. РГЛЮКОЭНД8ЭОЯ С, ч. Охл, доведена до 3. Атi Сл 0 к 4 мм 5 мкм Изократический режим, 0. М Н и 0 5М ТХУ 1. Плата крапп Пиршюксим. Осаждение белков 4мМ I. ПК Т ОКВ 0 ч 4. Изократичсский режим. ХаНГО4 буферный раствор. М КаСЮц, 8. МеСМ, 0 5 мл триттаиэлаиима. НСЮ ло 3. ФЛ л 5 нм Хм. Лиалишруемкн объект Определяемый компонент Проболел готовка Колонка Параметры разделения Элюенг Детектирование Лит. Биологические обратим Преншюднпе с ианапилиримицом Гомогенизация 5 ТХУ. Очистка 5ср ак Сл, Отчх. Дсмшл г и таким мредколоночнан. НурепИ 5 3 мкм Изократический режим. Фармацевтические прсиараь Биотин 0. М КИЛЮ,, ультразвуковая канна, доведение ло метки, филмр. СкгомнЬ КI5 0 х 4. Иаохрлтическнй режим, МсС0. М КН1Ч4 2. X Зяекроким. Вотн. Мультивитаминные таблетки Биотин 1. НСООН, смешивание, пеирнф. ТФСц. М ,ССДГ суамрпру 0 х 4 6 мм 5 мкм Изократический режим. Сыворотка Производное с чшрсншдиазом станом Экстракция МсОН. ШНШ 0x4 мм 5 мкм Изократический режим. Молочные продукты, детское питание Комплекс с стрсптпвидшюм И флуоресшяшом 6 мстафссфориая кислота, перемешивание. Очистка ТФЭ рРак С. НурспИ В1У5 Сг 0 х 4 мм 3 мкм Изохратичеекий режим, МсОН0. М фосфат 7. ФЛ А. Анализируемый 1 Iii аготопка арамсгри разделения Лит. Колонка Эдпосит Дстсктир. Летепс смеси и жидкие вчтачинилтрованные СЧССН Рас творение в поле. ОТЧИСЛЯВ. С. 5 мин. Инкуб. СС. Фильтр. Переключение колонок. X х мм Ум, x X 0 к 4. Градиентный режим. Л 0. X1 0. М 5 В . Диетические пролук . Отсаноамие мин при коми. До метки водой, экстрагирование гексаном, имжекци водного с. Си 0 х 4. ИШкрагичесхлй режим. Сиворотка кропи . Лоб. М 2мсрклптоэтанола. Ч смеслшлимс с двойным объемом л стоил центр нф. Иэокрдемчссклй режим. М 3. М ЭДТА и МеОН Элсетрохим. Апьимгируеммй объект робЮАГ0вв Параметры разделения Лит. Колонка люсгт Детектор. Продукты питания и премиксы мМ аиетапшй буферный раствор. МаСК. Инкуб, с аамидиой С мни. Доведение до 4 нагревание 0Ч мин. Охл доведение ДО ЧСТК. ДЬ7р. Асе 3 См 0 х 3 мм 3 мкм Градиентный режим. ТФУ 2. Пищсиыс продукты Свободный витамин В2жстредиия полой сяяэажпИ ттомии В обрЖимка пененном. Очистка мл1ноаффиннэд колонка. I 0 х 4 vi 5 мкм Градиентный режим. В МеОН ФЛ 0 им 2. ТХУ. Зкегракии. ТХУ. Грашкмпшй режим. А 0. М фосфатный буферный раствор Р. В МеОН АДС 0. Мирская вода ТФЭ Восх1с1и1 . С 0 x 4. ГряяиаптшП режим, А ЮмМ КНРрН6. В СФ им.