Иммуноаффинное концентрирование и тест-определение некоторых полициклических ароматических углеводородов и микотоксинов

• Автор: Юрасов, Николай Александрович
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 189 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ .ОБЗОР. ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ В МЕТОДАХ РАЗДЕЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ.

1.1. Иммуноаффинное концентрирование ПАУ и микотоксинов

1.1.1. Устройство и принцип работы иммуноаффинной колонки.

1.1.2. Аналитические характеристики иммуноаффинных колонок.

1.1.3. Применение зольгель технологии в создании сорбентов для иммуноаффинных колонок

1.2. Иммулофильтрационные тесты.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Вещества и материалы.

2.2. Конструкция и характеристики иммуноаффинной колонки

2.3. Конструкция иммунофильтрационного теста

2.4. Оборудование и методика измерений
2.5. Расчет аналитических характеристик тестметода
ГЛАВА 3. ИММУНОАФФИННОЕ КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ПАУ И ОХРАТОКСИНА А.
3.1. Иммуноаффинное концентрирование ПАУ
3.1.1. Сравнение сорбционных свойств зольгель материала и сефарозного геля
3.1.2. Изучение сорбционных свойств зольгель материала, содержащего антитела, специфичные к пирену
3.1.3. Изучение селективности зольгель сорбента по отношению к другим ПАУ
3.1.4. Получение зольгель материала с иммобилизованными
антителами на бензапирен и изучение его сорбционных
свойств
3.1.5. Применение полученных зольгель колонок при
определении ПАУ в природных объектах.
3.2. Иммуноаффинное концентрирование охратоксина А.
3.2.1. Зольгель сорбенты для иммуноаффинного концентрирования охратоксина А.
3.2.2. Сефарозный гель для иммуноаффинного концентрирования охратоксина Л.
ГЛАВА 4. МЕМБРАННЫЕ ИММУНОФИЛЬ1 РАЦИОННЫЕ ТЕСТЫ ДЛЯ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗЕАРАЛЕНОНА, ОХРАТОКСИНА А, ФУМОНИЗИНА В1.
4.1. Выбор оптимальных условий индивидуального определения микотоксинов в модельных растворах
4.1.1. Оптимизация условий определения зеараленона.
4.1.2. Оптимизация условий определения охратоксина А
4.1.3. Оптимизация условий определения фумонизина В1
4.2. Одновременное определение ЗЕЛ и ОТА в модельных растворах.
4.3. Оптимизация условий определения микотоксинов в пшенице
4.4. Оптимизация условий определения микотоксинов в кукурузе
4.5. Одновременное определение ЗЕА, ОТА и ФУМ в модельных растворах, пшенице и кукурузе
4.6. Новый подход к определению микотоксинов иммунохимичсским мембранным тестметодом на двух контрольных уровнях
4.7. Определение микотоксинов в кормовом силосе.
ГЛАВА 5. СНИЖЕНИЕ ФОНОВОГО СИГНАЛА В ИММУНОФИЛЬТРАЦИОННЫХ ТЕСТАХ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ
В КАЧЕСТВЕ ФЕРМЕНТА ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА
5.1. Выбор оптимальных условий тестопределения ДОН и I ГГ2 токсина в модельных системах.
5.1.1. Оптимизация условий определения НТ2 токсина
5.1.2. Оптимизация условий определения ДОН.
5.2. Одновременное определение ДОН и НТ2 в модельных растворах
5.3. Выбор оптимальных условий иммунофильтраиионного определения микотоксинов в пшенице и кукурузе
5.3.1. Оптимизация методики пробоподготовки пшеницы и кукурузы.
5.3.2. Влияние процедуры анализа на определение токсикантов
5.4. Одновременное определение ДОН и суммы Т2 и НТ2 токсинов в пшенице и кукурузе
5.5. Определение ДОН и суммы Т2 и НТ2 токсинов в кормовом силосе.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Иммунохимическое взаимодействие взаимодействие антигенантитело характеризуется высокой селективностью и достаточно высокой константой аффинности, что нашло широкое применение как в методах разделения и концентрирования иммуноаффинные колонки ИАК, магнитные сферы с иммобилизованными антителами, иммуноультрафильтрация, так и в методах определения твердофазный иммуноферментный анализ, поляризационный флуоресцентный иммуноанализ, иммуносенсоры и иммунотесты. В этой работе основное внимание уделено иммуноаффинному концентрированию с использованием ИАК и иммунофильтрационным тестам. Принцип иммунохимического связывания лег в основу действия иммуноаффинных колонок ИАК, служащих для выделения и концентрирования аналитов из сложных объектов. У антитела, аналит, А примеси Рис. Носитель может отсутствовать в этом случае антитела находятся в свободном виде и отделены полупроницаемой мембраной. Затем небольшое количество обычно 1 мл сорбента помещают в небольшую пластиковую колонку. Полученную колонку промывают фосфатносолевым буферным раствором, и затем неочищенный экстракт образца пропускают через данную колонку со скоростью порядка млмин. Жидкость может проходить через колонку под действием собственной силы тяжести, под создаваемым давлением или при создании вакуума на выходе из колонки. При этом аналит селективно связывается с антителами, а мешающие вещества могут либо проходить свободно через колонку, либо неспецифически сорбироваться. Анализируемая проба не должна содержать больших количеств органического растворителя обычно не более , так как они могут привести к деструкции антител или помешать образованию комплекса антигенантитело. Органические растворители также мешают при выделении неполярных аналитов 1. Для устранения неспецифически сорбированных мешающих компонентов смеси колонку промывают водносолевыми растворами иногда с небольшими добавками органических растворителей. На конечной стадии проводят элюирование аналита раствором, способным разрушить его комплекс с антителами. Для небольших молекул используют малые объемы метанола или ацетонитрила. Подобные растворители обычно применяют для коммерческих колонок. Альтернативным элюентом является буферный раствор на основе глицина и хлорида натрия. Для элюирования макромолекул создают кислотные условия. Затем элюат, содержащий определяемый аналит, можно проанализировать различными методами. Наиболее чувствительное определение обеспечивает иммуноаффинная экстракция в сочетании с ВЭЖХМСМС детектированием. Метод применяется для анализа продовольственного сырья, кормов, кофе, какао, шоколада, изюма, соков, вина, пива, пряностей, сыворотки крови и пищевых продуктов на зерновой основе 2. Альтернативными методами являются ВЭЖХ с УФ и флуориметрическим детектированием, твердофазный иммуноферментный анализ. В табл. ИАК для выделения различных аналитов. Таблица 1. ИАК ВЭЖХУФ активировашгая сефароза 4В метанол водный буферный раствор об. В1,В2, ,, охратоксин А, зеараленои зерновые Мультнфункцнональные ИАК ВЭЖХУФ, ВЭЖХФл коммерческие колонки , i , 6 метанол для ПрО ОТА 0. В пищевые продукты, фармпрепараты ИАК ВЭЖХУФ коммерческая колонка IX Vii В метанол 0. Мстаидростенолол пищевые продукты, корма ИАК ТФИФА сшитый хитозан с ковалентно иммобилизованными антителами метанол вода Г игмл геля . ИАК ВЭЖХУФ активированная сефароза 4В метанол 2 уксусная кислота , об. ИАК ВЭЖХУФ, ВЭЖХФл зольгель сорбент с инкапсулированными антителами ацетонитрил вода , об. ИАК ВЭЖХУФ зольгель сорбент с инкапсулированными антителами ацетонитрил вода , об. Судан 1,, III и IV пищевые продукты томатная паста, соусы ИАК ВЭЖХУФ СЫВгактивированная сефароза 4В метанол вода , об. Г 5, 6, 4 и 3 нг, для судан , II, III, IV, соотв. ИАКТФ ИФА СОДгактивированная сефароза 4В метанол вода , об. Г 4 нгмл геля Я . Полимерный монолит с ковалентно иммобил изованн ыми антителами метанол вода , об. ДОС 0. ИАКВЭЖХУФ СПВг активированная сефароза 4В метанол вода , об. ВЭЖХУФ магнитные наночастицы, покрытые золотом и антителами меганол ПрО 0. ИАК ВЭЖХУФ СиИ содержащий полимер, образующий комплексы с аминокислотами белка метанол вода , об.