Иммунохимические тест-методы определения токсикантов в продуктах питания и объектах окружающей среды

• Автор: Басова, Евгения Юрьевна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 167 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I 1 Общая характеристика микотоксинов и

1 2 Иммунохимические методы определения

ГЛАВА 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ и зз

2 1 Вещества и материалы зз

2 2 Получение и выделение антител

2 3 Приготовление носителей и связывание с антителами

2 4 Аппаратура и техника измерений

ГЛАВА 3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОХРАТОКСИНА А В ОБРАЗЦАХ ПИВА
3 1 Принцип действия тсстмстода
3 2 Иммунохимическое тсстопределенис охратоксина А в модельных растворах
3 3 Иммунохимическое тсстопредслсние ОТА в образцах пива
3 4 Анализ образцов пива
ГЛАВА 4 ПОЛУЧЕНИЕ ИММУНОРЕАГЕНТОВ И ОПТИМИЗАЦИЯ ТЕСТМЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ 2,4,6ТРИНИТРОТОЛУОЛА
4 1 Получение и тестирование поликлональных антпсывороюк
4 2 Изучение влияния структуры иммунореагентов на аналитические характерно ики тест метода
4 3 Минимизация неспецифической сорбции
4 4 Оптимизация тест метода
4 5 Определение 2,4,6тринитротолуола в образцах воды с помощью
тестметода
ГЛАВА 5 ИММУНОХИМИЧЕСКИЙ ТЕСТ ДЛЯ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗЕАРАЛЕНОНА И Т2 ТОКСИНА
5 1 Выбор оптимальных условий реализации колоночного тестметола для одновременного детектирования зеараленоиа и Т2 токсина
5 2 Разработ ка тест устройства, оптимизация техники эксперимента для совместною детектирования аналитов
5 3 Анализ образцов пшеницы
5 4 Иммунохимическое определение Г2 токсина и ЗЕА к кормах для животных
ГЛАВА 6 СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОХИМИЧЕСКИХ МЕТОДИК ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТРИПИНА. ОХРАТОКСИН А А И МИКОФЕНОЛОВОЙ КИСЛОТЫ В СЫРЕ
6 1 Изучение активности пероксидазных конъюгатов но
6 2 Разработка иммуноферментного анализа определения цитрипина, охратоксина А и микофеиоловои кислоты 1Ы
6 3 Разработка неиструментального тестметода для мультиопределения микотоксинов па примере цитрипина, охратоксина А и микофеиоловои кислоты
6 4 Оптимизация пробонодготовки сыра
6 5 Одновременное определение цитринина, охратоксина А и микофеиоловои кислоты в образцах сыра с использованием тесгметода и иммуноферментного анализа
ГЛАВА 7 НОВЫЕ НОСИТЕЛИ ДЛЯ КОВАЛЕНТНОГО СВЯЗЫВАНИЯ С БИОМОЛЕКУЛАМИ НА ОСНОВЕ НАНОЧАСТИЦ
7 1. Синтез наночастиц силикагеля и связывание антител
7 2 Разработка тестметода для определения токсикантов ш
ВЫВОДЫ ыз
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Другим немало важным загрязнителем окружающей среды и пищевых продуктов являются полиароматические углеводороды ПАУ в частности бензоапирен БАП, который попадает в жизненно важные объекты при производстве красителей, пестицидов, фармацевтических препаратов неполном сгорании топлива, утечке масла, нефтепродуктов, медленном растворении защитных покрытий 5. БАП обладает высокой канцерогенностью, мутагенностью, устойчивостью к химическому и биологическому разложению, а также способен накапливаться в живых организмах 6. Еще одним зафязиителем окружающей среды является 2,4,6тринитротолуол ТНТ. Он токсичен, обладает мутагенностью, устойчивостью, способен длительное время циркулировать в природных системах. Для контроля содержания данных токсичных соединений в объектах окружающей среды и продуктах питания существует 1руппа высокочувствительных физикохимических методов. Однако, традиционные методы определения обычно включает стадию пробоподготовки образца. Для ПАУ это жидкостьжидкостная экстракция 7, 8, микроэкстракция 9, , твердофазная экстракция , и суперкритическая жидкостная экстракция , . Г1АУ и ТНТ получили методы газовой и жидкостной хроматографии ВЭЖХ. Для микотоксинов в основном это ЖХ с применением массспектрометричсского и флуоресцентного детектирования. Также применяют амперометрические и спектрофотометрические детекторы. В связи с этим важным направлением в контроле состояния окружающей среды и безопасности продуктов питания является разработка и внедрение в практику иммунохимических методов ИХМ . Изза высокой чувствительности, специфичности, экспрессности, сравнительно низкой стоимости оборудования, ИХМ представляют собой быстроразвивающуюся область аналитической химии, которая использует достижения других наук и тесно связана с решением биологических, медицинских и экологических задач . ИХМ основаны на специфическом воздействии антигена определяемого вещества и антител. Индикацию и количественное определение комплекса проводят посредством регистрации глубины протекания взаимодействия антиген антитело на основе использования связанных с антителами или гаптенами меток ферментных, люминесцентных и других, после чего образовавшийся комплекс детектируют с помощью измерительных приборов. Применению ИХМ для определения токсинов посвящено несколько обзоров ПАУ 5, микотоксинов . В настоящее время доступны коммерческие тесты для контроля содержания наиболее распространенных микотоксинов. Микотоксины относятся к особо опасным контаминантам пищевых продуктов, встречающимся в естественных условиях. В настоящее время известно более 0 видов различных микотоксинов, более 0 штаммов, относящихся к 0 видам, продуцируют микотоксины . Доказано участие некоторых микотоксинов в патогенезе тяжелых заболеваний человека и животных, связанном с их канцерогенным, мутагенным и тератогенным эффектами. Согласно данным исследователей о микотоксинах, можно сделать вывод о повсеместном распространении как продуцентов, так и собственно токсинов. Характеристики наиболее часто встречающихся микотоксинов представлены в табл. Таблица 1. Афлатоксины 1, В2, 1, 2, i v, . Охратоксины . Зсаралснон . Таюкс известно, из плесени iii i была выделена микофеноловая кислота МФК, обладающая противовирусным, противоопухолевым, антибактериальным и противогрибковым действие, однако в виду своей высокой токсичности была введена в класс микотоксинов. Из культуры гриба . А, В, С и . Наибольшее токсикологическое значение имеет охратоксин А ОТА. Охратоксины, особенно ОТА, обнаружены в продуктах питания растительного происхождения в пшенице, овсе, ячмене, кукурузе, сое, рисе, а также кофейных зернах и какао, сушеных фруктах, винах и виноградном соке, пиве, специях . Структура и свойства. ОТА по своему биосинтетическому происхождению относится к группе поликетидов, является бесцветным кристаллическим соединением, проявляющим голубую флуоресценцию в УФлучах. ОТА в чистом виде нестабилен и очень чувствителен к действию света и воздуха, однако в виде раствора в этаноле сохраняется без изменений длительное время . Он хорошо растворяется в ацетоне, бензоле, ацетонитриле, хлороформе, спиртах. ОТА обладает собственной флуоресценцией. Биологическое действие. ОТА относится к канцерогенам второго класса опасности, обладает выраженной кумуляцией.