Электрохимический иммуносенсор для диагностики клещевого энцефалита

• Автор: Козицина, Алиса Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Екатеринбург
• Количество страниц: 128 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
Сокращения
Введение

Г лава 1. Литературный обзор

1.1. Биосенсоры

1.2. Иммуносенсоры

1.2.1. Типы иммуноанализа

1.2.2. Типы детектирования, используемого в иммуноанализе. Прямое и непрямое детектирование

1.2.2.1. Пьезоэлектрические иммуносенсоры

1.2.2.2. Оптические иммуносенсоры

1.2.2.3. Электрохимические иммуносенсоры
1.3. Постановка задачи
Глава 2. Аппаратура и техника эксперимента
2.1. Оборудование и средства измерений
2.2. Реактивы, приготовление растворов
2.3. Методика эксперимента
Глава 3. Предварительные исследования
3.1. Выбор трансдьюсера
3.2. Выбор методики иммобилизации биорецептора на поверхности графитсодержащих трансдьюсера
3.3. Нанокомпозиционные материалы
3.4. Трансдыосеры, модифицированные формазанами
Глава 4. Исследование возможности применения белка А в электрохимических иммуносенсорах
4.1. Белок А, меченый пероксидазой хрена.
4.2. Использование и разработка методов детектирования с использованием металлической метки
4.2.1. Белок А, меченый коллоидным золотом
4.2.2. Белок А, меченый коллоидным серебром
4.2.3. Использование афетопротеинов АФП в качестве модельной системы
Выводы
Список использованной литературы


Существующие методы диагностики вируса клещевого энцефалита, вопервых, длительны во времени, вовторых, требуют дорогостоящего оборудования метод иммунноферментного анализа ИФА. Именно в случае опасных вирусных инфекций особенно важной является диагностика, в идеальном случае, на месте, в небольших клиниках, поскольку это является залогом успешного лечения и полного выздоровления больного. Для решения этой проблемы требуется создание дешевых, простых, чувствительных и экспрессных методов диагностики и приборного обеспечения указанных методов. Привлечение электрохимических методов анализа, основывающихся на использовании биосенсоров для диагностики опасных инфекций, представляется весьма перспективным. Доказательством этому служит высокая чувствительность таких методов, хорошая воспроизводимость и селективность, простота аппаратурного оформления и возможность создания портативных приборов, пригодных для использования, как в лабораторных условиях, так и в небольших клиниках, низкая стоимость анализа по сравнению с другими методами. В последние годы наблюдается взрыв в количестве публикаций, посвященных развитию электрохимических биосенсоров для различных целей. Настоящая диссертационная работа посвящена развитию новых подходов к созданию электрохимического иммуносенсора. Ее актуальность определяется как изложенными выше соображениями, так и ожидаемым эффектом упрощением и ускорением получения необходимой медицинской информации. I i i i ii vi i i гг. Разработка лабораторного практикума по электрохимическим методам анализа. Аппаратурное и методическое обеспечение, гг. По теме Исследование и разработка новых методов иммобилизации биоматериала на поверхности электрода гг. Минобразования России. Нель работы. Создание нового электрохимического иммуносенсора, использование которого позволило бы исключить применение в анализе антивидовых антител, ферментов, специально вводимых реагентов, снизить предел обнаружения. Научная новизна. А с коллоидным металлом золотом, серебром. Практическая ценность работы. Создан новый электрохимический иммуносенсор для диагностики клещевого энцефалита. Использование этого сенсора позволяет исключить применение дорогих антивидовых антител, ферментов и введения специальных субстратов в анализируемый раствор. Предложенный сенсор обеспечивает снижение предела обнаружения до 0,2 нгмл в сыворотках крови инфицированных людей по сравнению со стандартным ИФА методом. Простота и экономическая эффективность сенсора позволяет организовать иммуноанализ на месте в небольших клиниках. Апробация работы. Результаты исследований представлены на 5 Семинаре I i Производство лабораторных прототипов Отроковицы, Чехия, г. Всероссийской конференции Электрохимические методы анализа ЭМА Москва, г. Семинаре I i Повышение производства и коммерциализации Лунд, Швеция, г. Международном семинаре Российские технологии для индустрии. Физические, химические и биологические сенсоры СПетербург, Россия, г. Датчик Судак, Украина, . Выражаю искреннюю благодарность научному руководителю д. Брайниной Х. З. главному врачу Центра лабораторной диагностики здоровья матери и ребенка г. Екатеринбурга, д. Бейкину Я. МГУ, к. Рубцовой М. НИЦ ПМТ ЦНИИ материалов СПетербург, д. Гордееву С. УГТУ УПИ г. Екатеринбург, д. Липуновой Г. Н. за предоставление образцов формазанов. ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. Биосенсор состоит из трансдыоссра и биораспознающего вещества. В ряде случаев сигналообразующей является реакция в анализируемом растворе со специально введенным в него субстратом. Новые лабораторные методы, основанные на регистрации отклика биореакции или химической реакции биологически важного вещества, появились в последние десятилетия. Многие из этих реакций используются или могут быть использованы в биосснсорах. Большое количество биосенсоров было разработано для исследований i viv, в медицине, пищевой промышленности, а также мониторинге окружающей среды. По способу детектирования рис. Многообразие биологического материала и способов иммобилизации его на поверхности или в объеме трансдыосера привело к появлению огромного количества биосенсоров.