Серологическая диагностика аденовирусного гепатита с тельцами - включениями гидроперикардита методом непрямого иммуноферментного анализа

• Автор: Борисова, Мария Сергеевна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 109 с. : ил.

Оглавление
1. Введение
2.Основная часть
2.1. Иммуноферментный анализ и его применение в ветеринарии
2.2. Аденовирусный гепатит с тельцами-включениями гидроперикардит

2.2.1. Распространение и ущерб, причиняемый этой болезнью
2.2.2. Характеристика возбудителя семейства Абепоуігісіае
2.2.3. Эпизоотологические данные болезни
2.2.4. Клинические признаки и патологоанатомические изменения у птиц при аденовирусном гепатите с тельцами-включениями гидроперикардите птиц..
2.2.5.Диагностика аденовирусного гепатита с тельцами-включениями
гидроперикардита

2.2.6. Профилактика и меры борьбы с болезнью
2.3. Собственные исследования
2.3.1. Получение специфических компонентов для иммуноферментного анализа
2.3.1.1. Получение очищенного антигена вируса
2.3.1.2. Получение отрицательной и положительной сыворотки крови

2.3.2. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител к аденовирусу в сыворотках крови кур
2.3.2.1. Определение оптимальных концентраций и условий взаимодействия компонентов
2.3.2.2. Определение диагностического титра сыворотки в иммуноферментном анализе
2.3.2.3. Способ опосредованного расчета титра антител
2.З.2.З.1. Определение коэффициентов линейной регрессии и
допустимых значений оптической плотности контрольных

сывороток
2.3.2.3.2.0пределение пороговых показателей реакции, разграничивающих специфическое и неспецифическое
взаимодействие
2.3.2.4. Оценка чувствительности и специфичности тест-системы
2.3.3. Практическое применение разработанной иммуноферментной
тест -системы
2.3.3.1. Изучение динамики формирования антител у цыплят, иммунизированных инактивированной сорбированной и эмульгированной формами вакцины против аденовирусного гепатита с
тельцами-включениями гидроперикардита
2.3.3.2. Серологический мониторинг на аденовирусный гепатит с тельцами - включениями гидроперикардит птиц в птицехозяйствах
3.Заключение
3.1 .Обсуждение результатов
исследований
3.2.Вывод ы
3.3. Практические предложения
Список сокращений
Список литературы
Приложение

1. Введение
Актуальность темы исследования. Надежное благополучие по инфекционным болезням является одним из непременных условий успешного ведения промышленного птицеводства.
Для крупных птицеводческих комплексов особую опасность представляют вирусные болезни, в том числе аденовирусный гепатит с тельцами-включениями гидроперикардит, из-за их недостаточной изученности, высокой контагиозное, большого разнообразия путей и факторов передачи инфекционного агента. Проблема вирусных болезней приобретает все возрастающую актуальность еще и по той причине, что некоторые инфекционные болезни стали протекать атипично, значительно возросла роль ассоциации различных агентов вирусной и бактериальной природы.
Аденовирусный гепатит с тельцами-включениями гидроперикардит (АДВГГ) (инфекционный гепатит с тельцами-включениями гидроперикардит, инфекционный гидроперикардит (ИГП) кур, болезнь Ангара, инклюзионный гепатит, гидроперикардиальный синдром) - высококонтагиозная вирусная широко распространенная болезнь цыплят, основными патологоанатомическими признаками которой являются накопление транссудата в перикардиальной полости, гепатит и нефрозо-нефрит. АДВГГ регистрируется во многих странах мира, как у бройлеров, так и у несушек. Экспериментально доказано, что в возникновении болезни доминирующая роль принадлежит первой группе аденовирусов, 1 и 4-го серотипов [11].
Степень тяжести течения АДВГГ в природных условиях во многом зависит от влияния некоторых иммунодепрессивных агентов, таких как вирус инфекционной бурсальной болезни, болезни Марека и вирусной анемии цыплят и тогда болезнь протекает со сложной симптоматикой. В связи с этим основная роль в постановке правильного диагноза на ИГП принадлежит лабораторным методам.

исследовании выявляют неспецифический миокардит, в гепатоцмтах устанавливают крупные, округлые базофильные или эозинофильные внутриядерные тельца-включения.
Для подтверждения диагноза ставят биопробу на цыплятах. Болезнь воспроизводится биопробой при заражении парентерально, а также оральным и контактным путями. Заражение проводят гомогепатом печени, полученным от птиц, павших с признаками ИГП. Инкубационный период при парентальном заражении обычно составляет 48-72 часа. Наибольший отход чаще наблюдается в первые 3-5 суток после заражения [2]. При экспериментальном заражении птицы не всегда удавалось вызвать заболевание инфицированием, подобным протекающему в естественных условиях, но при парентеральном введении эти изоляты оказывались высоко патогенными. Это еще раз доказывает, что аденовирусы являются потенциальными патогенами и только при наличии определенных условий или других патогенов способны индуцировать болезнь.
Изоляция аденовируса является неотъемлемой процедурой для последующего типирования. Вирус изолируют на первичных культурах клеток почки цыплят (КП) или эмбриональной печени цыплят (КЭП) [50]. Культуры клеток трахеи цыпленка и эмбриональных фибробласгов не чувствительны к заражению аденовирусами [111]. Хотя некоторые авторы, изучая репродукцию в культуре клеток куриных и перепелиных фибробластов аденовируса штамма Phelps, не наблюдали в этих культурах цитопатического действия, однако, присутствие вируса было зарегистрировано с помощью биопробы на 9 -суточных куриных эмбрионах и метода флюоресцирующих антител[38]. Иногда для изоляции аденовирусов I типа необходимо выполнить несколько пассажей в культурах клеток [94]. Нужно иметь в виду, что птица может быть контаминирована сразу несколькими серотипами и процедура пассирования может привести к потере одного штамма и в то же время способствовать росту другого по мере увеличения количества пассажей. Наличие аденовирусов в клеточной культуре подтверждается округлением клеток и впоследствии отторжением от стекла. При окрашивании гематоксилином и эозином