Создание и оценка трансгенных растений картофеля устойчивых к грибным болезням

• Автор: Крупенин, Роман Вячеславович
• Шифр специальности: 06.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. БОЛЕЗНИ КАРТОФЕЛЯ И ДОСТИЖЕНИЯ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ В

БОРЬБЕ С НИМИ

** 2Л. Фитофтороз

2.2. Альтернариоз

Г»1

2.3. Ризоктониоз

2.4. Рак картофеля

2.5. Сухая фузариозная гниль

2.6. Обыкновенная парша

/ 3. РОЛЬ АНТИМИКРОБНЫХ БЕЛКОВ ДЕФЕНЗИНОВ В ЗАЩИТЕ
РАСТЕНИЙ ОТ ФИТОПАТОГЕНОВ

* 3.1. Общее строение дефензинов
3.2. Экспрессия дефензинов в органах растений
3.3. Антимикробная активность дефензинов
3.4. Получение трансгенных растений с генами дефензинов и их устойчивость к болезням
4. ПЕРЕНОС ГЕНОВ В РАСТИТЕЛЬНЫЙ ГЕНОМ С ПОМОЩЬЮ
АГРОБАКТЕРИАЛЬНОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ
5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
5.1. Объекты исследований
^ 5.1.1. Растительный материал
5.1.2. Векторная конструкция и агробактериальные штаммы
5.1.3. Штаммы фитопатогенов
5.2. Место проведения и схема полевого и вегетационного опытов
' 5.3. Метеорологические условия 2002-2003 гг
5.4. Микроклональное размножение картофеля в условиях in vitro
5.5. Методика выделения ДНК из растительных тканей картофеля и ПЦРанализа
5.6. Методы оценки трансгенных растений на устойчивость к болезням
5.7. Биохимическая идентификация исходных и трансгенных растений с помощью белковых маркеров
5.8. Статистическая обработка данных
6. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
6.1. Оптимизация методики трансформации картофеля
6.1.1. Анализ чувствительности трансформантов к канамицину
6.1.2. Получение трансформированных растений картофеля с помощью штаммов LBA4404 и LGV3850 Agrobacterium tumefaciens
6.1.3. Получение трансформированных растений картофеля с помощью штамма A4 Agrobacterium rhizogenes
6.2. Оценка трансгенности трансформированных растений картофеля
6.3. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к грибным инфекциям
6.3.1. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к фитофторозу
6.3.2. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к альтернариозу
6.3.3. Характеристика устойчивости трансгенных линий картофеля к ризоктониозу in vitro
6.3.4. Лабораторная оценка устойчивости к раку картофеля
6.3.5. Лабораторная оценка устойчивости к сухой фузариозной гнили
6.3.6. Визуальная оценка устойчивости к парше обыкновенной
6.4. Определение урожайности трансгенных растений картофеля
6.5. Морфологические и физиологические особенности трансгенных линий картофеля
6.6. Комплексная оценка трансгенных линий картофеля
6.7. Доказательство соответствия трансгенного и исходного генотипов с помощью белковых маркеров
7. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЫРАЩИВАНИЯ
ТРАНСГЕННОГО КАРТОФЕЛЯ, УСТОЙЧИВОГО К ГРИБНЫМ
БОЛЕЗНЯМ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Ильинский и Раменский. Растения картофеля также трансформировали согласно методике. Исходя из результатов экспериментов по трансформации с использованием Agrobacterium Ште/аЫепх, предынкубацию проводили в темноте в течение 24 часов при температуре 4°С, а кокультивацию - при температуре 25°С в темноте в течение 1 часа. Регенерировали экспланты на питательной среде, которая использовалась при трансформации с помощью штаммов А§гоЬас1епит Ште/аает (основа МБвниикх; 0,2 мг/л ИУК; 2,24 мг/л БАП и 10 мг/л ГК). У одних эксплантов наблюдался только интенсивный ризогенез, а у других - некрозы с последующим разрушением тканей. С целью оптимизации методики трансформации с использованием Л^гоЬас1епит rhizogenes были исследованы несколько составов питательных сред с различными сочетаниями фитогормонов (табл. 7) и концентрацией Кш 25 мг/л.
Таблица 7.
Влияние различного соотношения фитогормонов в питательной среде
на выход регенерантов при трансформации штаммом А4 А. rhizogenes
Среда Сорт Наблюдения за регенерацией через 4 недели после инкубации Выход Кгп-устойчивых регенерантов, %
1 2 3
А Г олубизна Интенсивный ризогенез. Побегообразование отсутствует
Жуковский ранний
Ильинский Интенсивный ризогенез. Побегообразование отсутствует
Раменский Единичные корни на некоторых эксплантах
А' Голубизна Среда заросла через 4-7 дней
Жуковский ранний
Ильинский
Раменский