Функциональная активность лейкоцитов, перенесших крионабиоз при - 20\NаС

• Автор: Деветьярова, Ольга Нурзадиновна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Количество страниц: 122 с.

Список использованных сокращений

Глава I. Обзор литературы. Современное состояние проблемы

введения лейкоцитов в Холодовой анабиоз при температуре -20°С

1.1. Функциональные свойства лейкоцитов

1.2. Методы получения лейкоцитного концентрата и его применение

1.3.Сроки хранения лейкоцитов при различных температурах

1.4. Концепции и теории криоповреждения и криозащиты плазматических мембран

1.5. Криопротекторы и криоконсерванты, используемые при

замораживании лейкоцитов

1.6. Методы криоконсервирования лейкоцитов

Глава II. Материалы и методы исследований

Глава III. Результаты экспериментальных исследований
3.1. Разработка метода введения лейкоцитов в Холодовой анабиоз при -20°С
3.1.1. Применение экспоненциальной программы для замораживания лейкоцитов до -20°С
3.1.2. Выбор оптимального состава хладоограждающего раствора
3.1.3. Изучение влияния длительности хранения применяемого хладоограждающего раствора на сохранение его криозащитных
свойств
3.2. Исследование функциональных и морфологических свойств лейкоцитов крови человека до введения в Холодовой анабиоз (-20°С) и после выхода из
него
3.2.1. Действие криозащитного раствора на сохранность лейкоцитов
3.2.2. Определение оптимального срока хранения лейкоцитов... .■
3.2.3. Исследование функциональных и морфологических
свойств лейкоцитов крови человека при оптимальном сроке хранения с разными вариантами хладоограждающего раствора
3.3. Изучение биологических особенностей разработанного хладоограждающего раствора для лейкоцитов
3.3.1. Изучение «острой токсичности» хладоограждающего раствора
3.3.2. Изучение «хронической токсичности» хладоограждающего раствора
3.3.3. Изучение пирогенности хладоограждающего раствора
——3.3.4. Изучение переносимости экспериментальными животными
трансфузий концентрата лейкоцитов, замороженных с
разработанным хладоограждающим раствором
Глава IV. Обсуждение результатов экспериментальных исследований
Выводы
Список использованной литературы
Список опубликованных работ по теме диссертации
Список использованных сокращений
АФК - активные формы кислорода БТШ - белки теплового шока
ГМБТОЭМ - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина
ГМФШ - гексозомонофосфатный шунт
ГФ - Государственная Фармакопея
ГЭК - гидроксиэтилкрахмал
ДМАЦ - диметилацетамид
ДМСО - диметилсульфоксид
ЛД5о - средняя летальная доза
- ЛК-лейкоцитный концентрат
МПО - миелопероксидаза
НАДФ - никотинамидцинуклеотидфосфат
НСТ - нитросиний тетразолий
ОМЭПС - оксиметилэтилпиридина сукцинат
ГШП - поливинилпирролидон
ПД - пропандиол
ПОЛ — перекисное окисление липидов
РНИИГТ — Российский НИИ гематологии и трансфузиологии
ТМД - трансмембранные дефекты
ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов
ФИ — фагоцитарный индекс
ЭДТА Na2 - динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты ЭКГ - электрокардиограмма CDF - цитратфосфатдекстроза
экспонировали в течение 24 часов: в серии 1 - при +20°С, в серии 2 - при +4°С, в серии 3 - при -20°С (вводили в криоанабиоз по стандартной программе). Замороженный биообъект через 24 часа размораживали в течение 35-45 сек и последующие 24 часа экспонировали при +20°С (серия За) и при +4°С (серия 36). В каждой серии оценивали (по описанным выше методикам) жизнеспособность лейкоцитов, их количество, морфологический состав и ФАН через 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 24 часа.
Изучение стабильности хладоограждающих свойств применяемого раствора проведено согласно «Временной инструкции по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода ускоренногохтарения при повышенной-температуре» (1979) на 9 пробах (270———— исследований). Исследовали раствор через 45 суток с момента его изготовления и хранения при +60°С, что соответствует двум годам хранения при +4°С. До замораживания оценивали прозрачность и pH раствора. Замораживание лейкоцитов проводили по экспоненциальной программе до -20°С; их хранили в течение 24 часов, после чего оценивали жизнеспособность и количество лейкоцитов, их морфологический состав,
ФАН и окислительно- восстановительный метаболизм (по НСТ-тссту).
Для изучения биологических особенностей криозащитного раствора были использованы лабораторные животные (табл. 2.1).
Количество лабораторных животных исследованиях Таблица 2.1 использованных в экспериментальных
Виды животных Число животных
Лабораторные мыши
Кролики
Беспородные собаки
Всего
Испытание хладоограждающего раствора на «острую» токсичность проводили на белых мышах обоего пола (п=5) массой 19-20 г., согласно