+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Особенности регуляции биосинтеза полигидроксибутирата у Methylobacterium extorquens

Особенности регуляции биосинтеза полигидроксибутирата у Methylobacterium extorquens
  • Автор:

    Белова, Лариса Леонидовна

  • Шифр специальности:

    03.00.04

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

  • Место защиты:

    Б. м.

  • Количество страниц:

    99 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы
"
1.2 Метаболические пути синтеза ПГБ 
1.4 Характеристика ферментов синтеза ПГБ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ


СОДЕРЖАНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Продуценты ПГБ

1.2 Метаболические пути синтеза ПГБ

1.3 Метаболизм ПГБ

1.4 Характеристика ферментов синтеза ПГБ

1.4,/3-кетотиолаза

1.4.2 НАДФН-зависимая ацетоацетт-КоА редуктаза

1.4.3 ПГА-синтаза


1.5 ВЗ АИМОСВЯЗЬ ЦТК И БИОСИНТЕЗА ПГБ
1.5.1 Свойства цитратсинтаз
1.5.2 Цитратсинтаза аэробных метилобактерий
1.6 Изоцитратдегидрогеназа и ее регуляция
1.7 Контроль синтеза полимера у продуцентов ПГБ
1.7.1 Регуляция синтеза ПГБ у Alcaligen.es еМгорйш
1.7.2 Регуляция синтеза ПГБ у Zoogloearamigera
1. 7.3 Синтез ПГБ представителями рода Азо!оЬас(ег
1.7.4 Регуляция синтеза ПГБ у Ме1Ьу1оЬас1егшт гЬодезшпит
1.8 Организация генов синтеза ПГБ
1.9 Влияние внутрицитоплазматических включений ПГБ на клеточный объем микроорганизмов
1.10 Заключение
2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Объект исследования и культивирование
2.2 Приготов ление бесклеточных экстрактов
2.3 Гель-фильтрация экстрактов на сефадексе
2.4 Определение активностей ферментов
2.5 Очистка НАДФН-ацетоацетил-КоА редуктазы
2.6 Очистка цитратсинтазы
2.7 Очистка НАДФ+-изоцитратдегидрогеназы
2.8 Определение кинетических параметров НАДФН-ацетоацетил-КоА редуктазы, цитратсинтазы и НАДФ+-изоцитратдегидрогеназы
2.9 Определение оптимального значения pH
2.10 Определение молекулярной массы нативных ферментов
2.11 Измерение интенсивности дыхания
2.12 Определение включения 2С14-ацетата в ПГБ
2.13 Экстракция и определение внутриклеточного содержания метаболитов
2.14 Аналитические методы
2.15 Реактивы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 Метаболические изменения у М Ехтояоитя при синтезе ПГБ
3.2 Очистка и характеристика НАДФН-ацетоацетил-КоА редуктазы
3.2.1 Процедура получения препарата НАДФН-ацетоаііетш-КоА редуктазы
3.2.2 Свойства НАДФН- ацетоацетил-КоА редуктазы
3.3 Очистка и характеристика цитратсинтазы
3.3.1 Процедура получения гомогенного препарата цитратсинтазы
3.3.2 Свойства цитратсинтазы
3.4 Очистка и характеристика ГІАДФ+-изоцитратдегидрогеназьі
3.4.1 Получение препарата НАДФ' -изоцитратдегидрогеназы
3.4.2 Свойства НАДФ-изоцитратдегидрогеназы
3.5 Влияние специфических ингибиторов на включение 2ы С-ацетата в ПГБ
3.6 Внутриклеточные концентрации пиридиннуклеоттщов и АТФ
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1 Метаболический путь синтеза ПГБ у М. Ехтояотт
4.2 Роль изоцитратдегидрогеназы и формиатдегидрогеназы в обеспечении синтеза ПГБ НАДФН
4.3 Регуляция синтеза ПГБ у М. ЕХТОядиЕ№
4.3.1 Свойства НАДФН-ацетоацетш-КоА редуктазы
4.3.2 Свойства цитратсинтазы
4.3.3 Свойства НАДФ" -изоцитратдегидрогеназы
4.3.4 Динамика активностей ферментов и внутриклеточных концентраций пиридиннуклеотидов и АТФ во время синтеза ПГБ
4.4 Сравнительный анализ регуляторных моделей сериновых мегилотрофов
4.5 Роль ЦТК в биосинтезе ПГБ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПГБ - полигидроксибутират
ИДГ - изоцитратдегидрогеназа
АКР - ацетоацетил-КоА редуктаза
ЦТК - цикл трикарбоновых кислот
ЦС - цитратсинтаза
КоА - кознзим А
А-КоА - ацетил-КоА
Аа-КоА - ацетоацетил-КоА
БСА - бычий сывороточный альбумин
ДТТ - дитиотреитол
ДТНБ - дитионитробензоат
ДХФИФ - дихлорофенолиндофенол
ФМС - феназинметосульфат
ОРС - открытая рамка считывания
кДа - килодальтон
Трис - трис(гидроксиметил)аминометан
ПЭГ-6000 - полиэтиленгликоль с молекулярной массой 6000
ЭДТА - этилендиаминтетраукеусная кислота
ицл - изоцитратлиаза
СССР - карбоиилцанид-т-хлорофенилгидразон
ХЕПЕС - Н-|2-1Идроксютил]ниперазин-Ы’[2-этан)сульфоновая кислота
ВЕАЕ - диэтиламиноэтил
ТГФ - тетрагидрофолат
МПТ - ме ганоптерин
МТГФ - метилентетрагидрофолат
МТГМПТ - метилететрагидрометаноптерин
ТХУ - трихлоруксусная кислота
БЦБ - додецилсульфат натрия
ПААГ - полиакриламидный гель
дА мин 1 - изменение оптического поглощение в минуту
ацетил-КоА направляется главным образом в ЦТК. Напротив, в лимите по азоту внутриклеточная концентрация НАДН определяет только 25% активности ЦС, уровень КоА быстро снижается, благодаря чему активность ß-кетотиолазы значительно возрастает. Изменения в активности ЦС приводят, по-видимому, к возрастанию концентрации ацетил-КоА, что также способствует увеличению активности ß-кетотиолазы.
При росте ка фруктозе М. rhodesianum накапливал ПГБ в экспоненциальной фазе роста, когда нет ограничения в питательных веществах (Ackermann and Babel, 1997).
Такое различие в накоплении ПГБ при росте на метаноле и фруктозе отражает отличие в физиологических функциях образующегося продукта. Синтез ПГБ в лимитированных условиях культивирования на метаноле играет роль стока электронов. Напротив, во время роста на фруктозе образуется недостаточно энергии, возможно, из-за низкой активности ЦТК. Рассматривая синтез ПГБ из фруктозы как вид ферментации, производящей восстановительную энергию, авторы выдвигают гипотезу «узкого места» в продукции энергии при росте на фруктозе, что вызывает ассоциированный с ростом синтез ПГБ. Основанием для данной гипотезы служит сравнение потоков утлерода с активностями ферментов ЦТК и синтеза ПГБ, а также влияние окисления формиата на синтез полимера. Дополнительная к фруктозе подача формиата, который выступает в виде самостоятельного и независимого от ЦТК генератора НАДН, репрессировал синтез ПГБ у М. rhodesianum, хотя рост при этом продолжался (Ackermann and Babel, 1997)
Исследование внутриклеточных концентраций КоА, ацетил-КоА, НАД(Ф)(Н), АТФ, АДФ, АМФ у М. rhodesianum (Motbes et а!., 1998) показало, что концентрация КоА (0,037мМ) при росте на фруктозе позволяет ß-кетотиолазе сохранить активность на уровне 20% от активности в экстракте, что, видимо, обеспечивает синтез ПГБ . Концентрации НАДФН и НАДН (0,37 и 0,31мМ, соответственно) при росте на фруктозе таковы, что насыщают НАДН-АКР и НАДФН-АКР и, по-видимому, не регулируют синтез ПГБ в данных условиях. Однако уровни указанных веществ, за исключением АМФ и АДФ, уменьшаются при переходе М. rhodesianum с метилотрофного роста на накопление ПГБ на фруктозе, в то время как активности ß-кетотиолазы, НАДН-АКР, НАДФН-АКР и ЦС существенно не изменяются. Это противоречит данным о свойствах ферментов и наводит на мысль о существовании дополнительных регуляторных механизмов, обусловливающих не индуцированный синтез полимера на фруктозе.
Другие дополнения в регуляторную модель М rhodesianum могут появиться в связи с исследованием метаболических путей синтеза ПГБ. Принято считать, что метилотрофные продуценты ПГБ синтезируют гомополимер «классическим», трехста-

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 1.190, запросов: 966