Характеристика вирулентного потенциала клинических изолятов энтерококков, выделенных от животных

• Автор: Пошвина, Дарья Владимировна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 119 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общая характеристика микроорганизмов рода ЕМегососст

1.2 Факторы патогенности энтерококков

1.3 Факторы персистенции энтерококков

1.4 Устойчивость энтерококков к антибактериальным препаратам

И. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

2.1.1 Выделение и идентификация микроорганизмов

2.1.2 Методы изучения биологических свойств бактерий рода ЕЫегососст
2.1.2.1 Определение факторов патогенности бактерий
рода Етегососсш
2.1.2.2 Определение факторов персистенции бактерий
рода Ешегососст
2.1.2.3 Определение антибиотикочувствительности бактерий
рода ЕШегососсиь
2.1.3 Статистическая обработка результатов
2.2 Видовой состав и факторы персистенции энтерококков, выделенных при инфекционно-воспалительных заболеваниях
2.3 Характеристика факторов патогенности энтерококков на уровне..
фено- и генотипа
2.4 Антибиотикорезистентность бактерий рода ЕМегососст
2.5 Разработка математической модели прогнозирования длительности течения заболевания
III. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
ПРИЛОЖЕНИЕ А
ПРИЛОЖЕНИЕ Б
ПРИЛОЖЕНИЕ В

ВВЕДЕНИЕ
Микроорганизмы рода Enterococcus — облигатные представители нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта млекопитающих (Soheili S. et al., 2014). В то же время энтерококки, являясь потенциально-патогенными бактериями (Yuen G.J., Ausubel F.M., 2014), играют важную роль в этиологии и патогенезе ряда заболеваний животных: маститов (Madsen P.S. et al, 1974; Keis S. et al., 2003), инфекций мочевыводящих путей (Шуляк Б.Ф., 2003; Pomba C. et al., 2010), септических состояний и эндокардитов (Ятусевич А.И., Андросик H.H., 2001).
Современные методы исследования микроорганизмов позволили обнаружить различные факторы патогенности энтерококков, способствующие развитию инфекционного процесса. К таким факторам можно отнести поверхностные белки, участвующие в процессах адгезии и инвазии; экскретируемые белки и токсины, обеспечивающие повреждение тканей хозяина; белки, обуславливающие устойчивость к антибиотикам и иммунитету хозяина, а также факторы, индуцирующие воспаление (Su Y.A. et al., 1991; Lowe A.M. et al., 1995; An F.Y. et al., 1999; Nilsen T. et al., 2003). Данные генетические элементы, называемые «островами» патогенности, могут содержать различный набор генов патогенности, включая гены устойчивости к антибиотикам (Бондаренко В.М., 2001). Присутствуя в биоценозе, бактерии рода Enterococcus взаимодействуют с другими видами условно-патогенных микроорганизмов и представителей нормальной микрофлоры животных и могут передавать мобильные элементы генома с генами патогенности от одного штамма другому (Hammerum A.M., 2012).
Проблема патогенности энтерококков связана также с выраженной приобретенной и природной резистентностью данной группы микроорганизмов к широкому спектру антибактериальных препаратов.

Таблица
Расчетная таблица для определения количества бактерий в 1 мл жидкости
(Фельдман Ю.М., 1984)
Количество бактерий, выросших на секторе Количество бактерий в 1 мл жидкости
1-м 2-м 3-м 4-м
1-6 Нет роста Нет роста Нет роста 1
8-20 То же То же То же 1
21-30 -«- -«- -«- 5
31-60 -«- -«- -«- 10
70-80 -«- -«- 50
100-150 5-10 -«- -«- 100
Очень
большое 20-30 -«- -«- 500
количество
То же 40-60 -«- -«- 1000
-«- 100-140 10-20 -«- 5000
-«- Очень
большое 30-40 -«- 10000
количество
-«- То же 60-80 Единичные 50000
-«- -«- 80-140 От 100000
единичных

Идентификацию культур энтерококков проводили с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для постановки ПЦР бактериальные лизаты получали с помощью реагента «ДНК-Экспресс» (Литех, Россия). Для этого суточную агаровую культуру энтерококков петлёй вносили в пробирку с реагентом, перемешивали на микроцентрифуге-встряхивателе в течение 10 секунд, помещали пробирку в твердотельный термостат и инкубировали при температуре +98°С в течение 20 минут. После завершения инкубации пробирки центрифугировали при 12000 об/мин при комнатной температуре в течение 15 секунд. Надосадочную жидкость помещали в чистые пробирки.