Сравнительная оценка информативности инвазивных и неинвазивных методов диагностики хеликобактериоза

• Автор: Матевосов, Давид Юрьевич
• Шифр специальности: 14.00.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : 24 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Актуальность проблемы

1.2. Общая характеристика Helicobacter pylori

1.3. Эпидемиология хеликобактериоза

1.4. Роль Нр в этиологии и патогенезе заболеваний верхних отделов желудочно-кишечного тракта

1.5. Диагностика Нр инфекции

1.5.1 .Особенности диагностики

1.6. Методы диагностики Нр инфекции

1.6.1. Бактериологический метод
1.6.2. Морфологический метод
1.6.3. Биохимический (уреазный) метод
1.6.4. ПЦР диагностика
1.6.5. Иммунологические методы диагностики
1.6.6. Изотопические методы диагностики Нр
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика больных
2.2. Методы исследования
2.2.1. Эндоскопия
2.2.2. Методы диагностики Нр инфекции
2.4. Методы статистического анализа
2.5. Дизайн исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Характеристика больных
3.2. Данные эндоскопического исследования
3.3. Результаты морфологического исследования слизистой оболочки желудка

3.4. Молекулярная диагностика ДНК Нр методом ПЦР в биоптате
3.5. Бактериологическое исследование
3.6. Серологическая диагностика методом полуколичественного определения антител к Нр в сыворотке крови
3.7. Молекулярная диагностика ДНК Нр методом ПЦР в кале
3.8. Результаты уреазного дыхательного теста
3.8.1. Результаты С-УДТ с модифицированным протоколом
3.8.2.0собенности распределения значений 13С-УДТ до и после лечения
3.8.3. Сравнительный анализ двух протоколов проведения 13С-УДТ
3.8.4. Сопоставление данных 13С-УДТ мод. с результатами морфологического метода
3.9. Диагностические характеристики методов диагностики Нр
3.9.1. Диагностические характеристики морфологического метода
3.9.2. Диагностические характеристики метода определения ДНК Нр ПЦР в биоптате
3.9.3. Диагностические характеристики микробиологического метода
3.9.4. Диагностические характеристики серологического метода
3.9.5. Диагностические характеристики метода ПЦР в кале
3.9.6. Диагностические характеристики 13С-УДТ станд
3.9.7. Диагностические характеристики 13С-УДТ мод
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список сокращений:
,3С-УДТ - 13С уреазный дыхательный тест
13С-УДТ мод. - 13С уреазный дыхательный тест с модифицированным протоколом проведения
|3С-УДТ станд. - 13С уреазный дыхательный тест со стандартным протоколом проведения
ГЭРБ - гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь ЖКТ - желудочно-кишечный тракт ИК - инфра красный ИЛ - интерлейкин
ИПП - ингибитор протонной помпы ИФА - иммуноферментный анализ ЛК - лимонная кислота ЛО - ложноотрицательный ЛИ - ложноположительный MC - масс-спектрометр
НПВП - нестероидные противовоспалительные препараты
Нр - Helicobacter pylori
CagA - cytotoxin-associated marker gene
СОЖ - слизистая оболочка желудка
ХГ - хронический гастрит
ХГД- хронический гастрит и дуоденит
ЦТК - цикл трикарбоновых кислот
ЭГД - эрозивный гастрит и дуоденит
ЯБ - язвенная болезнь
ЯБДПК - язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки ЯБЖ - язвенная болезнь желудка ЯБС - язвенная болезнь сочетанной локализации BabA - blood group antigen adhesin

Выделяют следующие этапы бактериального исследования: сбор и транспортировка проб в лабораторию, посев материала, инкубация посевов, выделение и идентификация Нр, выделение культур [24,54]. К сожалению, этот вид микроорганизма крайне “капризен” и процент высеваемости Нр зависит от таких факторов как: оснащенность микробиологической
лаборатории, наличие специальных транспортных и селективных сред для выращивания Нр, а также квалификации персонала. Нр - микроаэрофил и концентрация кислорода в атмосферном воздухе слишком высока, и действует на него губительно. Поэтому необходимо строго соблюдать правила транспортировки биопсийного материала на бактериологическое исследование для того, чтобы сохранить этот микроорганизм в жизнеспособном состоянии. Для решения этой проблемы используют транспортные среды, которые позволяют продлить срок транспортировки от 30 мин до 2 суток.
На ранних этапах изучения Нр использовали достаточно простые транспортные среды, такие как, физиологический раствор, применение которого позволяло продлить срок транспортировки не более 30 мин. или 0,5 мл 20% раствор глюкозы, позволяющий при температуре 4 °С сохранять биоптат в течение 5 часов [99]. Однако применение специальных транспортных сред (Стюарта, Кэри-Блер, Био Мерьо, Portagem pylori) позволило продлить время транспортировки биоптата в микробиологическую лабораторию до 1-2 суток. Материал должен быть помещен в глубь среды и храниться при +4 °С; чистая культура Нр в этой среде может сохранять свою жизнеспособность до 4-5 дней [34,12]. Позднее было установлено, что сохранение слоя слизи на биоптате слизистой оболочки существенно для получения более достоверных результатов.
Следующий шаг - посев биоптата. Перед посевом биопсийного материала на питательные среды его помещают в 0,5 мл свежеприготовленного физиологического раствора и гомогенизируют в течение 1 мин (используется гомогенизатор при 10 000 об/мин в течение 10-