Особенности биоценозов и адгезии лактобактерий и C. albicans при физиологической и осложненной гестозом беременности

• Автор: Никитин, Михаил Викторович
• Шифр специальности: 14.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 79 с. : 5 ил.

Содержание

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Микробный пейзаж влагалища в норме

1.2.Факторы колонизационной резистентности влагалища

1.3. Дрожжеподобные грибы рода Candida

1.3.1. Факторы патогенности Candida spp

1.3.1.1. Клеточная стенка

1.3.1.2.Антигены Candida spp

1.3.1.3. Адгезия Candida spp

1.3.1.4. Литические ферменты Candida spp
1.3.1.5. Изменчивость С.albicans
1.4. ВАГИНАЛЬНЫЙ КАНДИДОЗ
1.4.1.Этиология
1.4.2. Эпидемиология
1.4.3. Патогенез
1.4.4. Клинические проявления
1.4.5. Лабораторная диагностика
1.4.6. Лечение
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1.Характеристика коллекции микроорганизмов
2.2.Питательные среды
2.3. Растворы
2.4. Ферменты
2.5.Оборудование
2.6.Взятие материала на исследование
2.7. Микробиологические методы
2.7.1. Изучение морфологических и культуральных
свойств микроорганизмов
2.7.2.Выделение чистой культуры и ее идентификация
2.7.3. Количественный подсчет микробов в материале
2.7.4. Определение антагонизма лактобактерий
2.7.5. Исследование адгезивной активности
L.fermentum 90-TS-4(10) и 90-TS-4(21)
2.7.6. Забор влагалищного эпителия для исследования
адгезивной активности С.albicans
2.7.7. Исследование адгезивной активности С.albicans
2.7.8. Определение антагонизма между С.albicans и эубиотическими
штаммами лактобактерий
2.7.8.1. Определение антагонизма между С.albicans и эубиотическими штаммами лактобактерий на плотной среде

2.7.8.2. Определение антогонизма между С.albicans и эубиотическими
штаммами лактобактерий в жидкой среде
2.7.9.Оценка жизнеспособности L.fermentum 90-TS-4(21)
2.7.10.Метод выявления АГ хламидий флюоресцирующими моноклональными АТ
2.8. Молекуляр но-генетические методы
2.8.1. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
2.9.Клинические методы
2.9.1 Обоснование диагноза
2.9.1.1. Обоснование диагноза «вагинальный кандидоз»
2.9.1.2. Обоснование диагноза «гестоз»
2.9.2.Критерии формирования групп
2.10. Статистическая обработка результатов исследования
Глава 3. Клиническая характеристика обследуемого контенгента
Глава 4.Результаты собственных исследований и обсуждение
4.1. Обоснование диагноза ВК
4.2 Лечение ВК
4.3. Особенности течения кандидозной инфекции у беременных в III триместре
4.4. Исследование изолятов ДПГ p.Candida методом ПЦР
4.5. Бактериологическое исследование
4.6.Исследование адгезии
4.6.1. Исследоание адгезии С.albicans на ВЭ небеременных
4.6.2. Исследование адгезии С.albicans на ВЭ беременных III триместра
4.7. Влияние физических и химических факторов на
аффинность адгезинов С.albicans к рецепторам ВЭ
4.8. Исследование эубиотического высокоадгезивного штамма L.fermentum 90-TS-4[21]
4.9. Исследование антагонизма
4.9.1 .Исследование антагонизма лактобактерий
4.9.2. Исследование антогонизма между штаммами С.albicans, выделенных от больных ВК и кандидоносителей, и L.fermentum 90-TS-4[21],
L.fermentum 90-TS-4[10] и L.plantarum RA3
Заключение
Практические рекомендации
Выводы
Список литературы

Список сокращений
АГ - антиген(ы)
АСГ - аспарангиназа АТ - антитело(а)
БВ - бактериальный вагиноз
ВК - вагинальный кандидоз
ВЭ - влагалищный эпителий
ДПГ - дрожжеподобные грибы
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
ЗППП - заболевания передаваемые половым путем
ИАЛ - индекс адгезивности лактобактерий
ЛИ - лазерное излучение
НВ - неспецифический вагинит
ПМС - предменструальный синдром
ПФО - полифенилоксидаза
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РТ - ретикулярное тело
СПА - средний показатель адгезии
СПАЕ - средний показатель адгезивной емкости
ФБ - фосфатный буфер
ФИТЦ - флюоресцеинизотиоцианат
ФР - физиологический раствор
ФСБ - фосфатно-солевой буфер
ЭТ - элементарное тело

под люминесцентным микроскопом выглядело как булавочный прокол ярко-зеленого цвета, РТ - в 2-4 раза крупнее.
Результат считали положительным, если во всем препарате внеклеточно определялось не менее 10 ярко-зеленых ЭТ (в виде точки) или РТ (в виде точки или овала), четко выделявшихся на красном фоне контрастно окрашенных клеток или на желтом фоне препарата.
Выявление внутри клеток даже одного типичного цитоплазматического включения хламидий изумрудного цвета было достаточно, чтобы считать результат положительным.
Результат считали отрицательным, если при наличии в соскобе не менее 50 эпителиальных клеток не выявлялись хламидийные тельца.
В случае выявления менее 10 телец хламидий и/или отсутствия (или малого количества) эпителиальных клеток в соскобе необходимо повторить исследование.
Исследование проводилась Е.Д.Фединой, кафедра микробиологии РУДН.
2.8.Молекулярно-генетические методы
2.8.1. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
ДНК-исследование (ПЦР) проводилась в ЗАО “Лаборатория генно-инженерных систем «ЛАГИС». Выделение ДНК ДГТГ p.Candida из коллекции культур проводилось по модифицированной методике Boom [76, 80, 148]. Характеристика ПЦР-тест-систем приведена в табл.1 в гл.4 «Результаты собственных исследований». Мишенями были выбраны:
1) для Сап - фрагмент рибосомальных генов, специфичный для рода Candida [120],
2) для Саа - фрагмент рибосомальных генов, специфичный для вида С.albicans [68],
3) для Саг - последовательность видоспецифичного ретротраспозона
[84],
4) для Cash - фрагмент гена хитин-синтетазы, принимающей активное участие в формировании гиф [85],
5)для CaNrg - фрагмент гена негативной регуляции гифообразования, видимо, являющегося регулятором транскрипции гифоспецифичных генов [138].
Реакционная смесь для ПЦР (конечный объем 25 мкл) содержала: ЮмМ Tris НС1 (pH 8,7), 50мМ КС1, 2мМ MgCl2, 0,25 мМ каждого dNTP, по 10 пмоль каждого праймера, 1ед. Taq - полимеразы, 5 мкл препарата ДНК. Для увеличения специфичности отжига праймеров применялся вариант «горячего» старта, предусматривающий механическое разобщение компонентов реакционной смеси (нуклеотиды+праймеры / полимераза + матрица) парафиновым барьером до момента прогревания пробирки до температуры 70-80°С в начале первого цикла амплификации.