Эффективность иммунотропного действия антител к CD-4 и гамма-интерферону человека при лечении ВИЧ-инфицированных больных с ассоциированным туберкулезом

• Автор: Кляусов, Андрей Сергеевич
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Волгоград
• Количество страниц: 84 с. : 23 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

Глава I. Обзор литературы

1. Влияние ВИЧ на риск возникновения туберкулеза

1.1 Особенности терапии ВИЧ-инфицированных пациентов с туберкулёзом

1.2 Эффективность и безопасность АРВТ при терапии ВИЧ-инфекции с сочетанным туберкулезом

1.3 Подходы к специфической профилактике ВИЧ-ассоциированного туберкулёза

1. 4 Особенности применения афинно-очищенных антител

1.5 Иммунотропные свойства антител к гамма-интерферону и С04 клеткам человека

Глава II. Материал и методы исследования

2.1 Характеристика групп больных, выбор сроков исследования

2.2 Иммунофенотипирование лимфоцитов
2.3 Определение уровней цитокинов методом
иммуноферментного анализа
2.4 Определение вирусной нагрузки
2.5 Статистическая обработка данных
Глава III. Результаты собственных исследований
3.1. Влияние антител к СО-4 и интерферону-гамма человека на субпопуляционный состав циркулирующих лимфоцитов
3.2. Влияние антител к СБ-4 и интерферону-гамма человека на концентрации цитокинов в сыворотке крови

3.3. Влияние антител к СВ-4 и интерферону-гамма человека на вирусную нагрузку ВИЧ в периферической крови
Глава IV. Обсуждение полученных результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Введение Актуальность проблемы
По данным ВОЗ, более 30% населения планеты инфицировано микобактериями туберкулеза, и ежегодно регистрируется до 8 миллионов новых случаев [233, 234]. При этом наличие ВИЧ у больных туберкулёзом значительно ухудшает течение болезни и ведёт к повышению смертности, а риск заражения туберкулёзом у ВИЧ-инфицированных лиц повышен более чем в 100 раз, что связано с взаимно отягощающим действием этих инфекций [57,55,225,219,215, 186].
Примерно каждый третий ВИЧ-инфицированный пациент умирает от ассоциированного туберкулёза. ВИЧ разрушает компоненты клеточного иммунитета, и в первую очередь — С04-лимфоциты [3, 238, 233,231, 135]. Эти клетки продуцируют интерферон-гамма, обеспечивающий адаптивный иммунный ответ первого типа, при котором происходит активация макрофагов и последующее уничтожение внутриклеточных бактерий [37, 27, 10, 217]. Именно этот механизм препятствует развитию туберкулёзной инфекции, а его дезактивация приводит к возникновению активных форм заболевания, а также внелёгочных проявлений и бессимптомных форм [52, 30, 20, 103].
Помимо снижения возможности иммунной системы отвечать на микобактерии, ВИЧ увеличивает чувствительность к туберкулёзной инфекции и риск прогрессирования в активную фазу заболевания. При этом диагностика туберкулёза у лиц, инфицированных ВИЧ, часто запаздывает, что связано частым возникновением атипичных клинических признаков и присоединением других инфекций [55, 53, 135, 143, 120].
В то же время, ранняя диагностика и подбор адекватной терапии
позволяют успешно лечить туберкулёз у больных с ВИЧ, что требует от
пациентов строгой приверженности режиму приёма препаратов на

мкл клеточной взвеси. Ресуспендированную клеточную взвесь разносили по пробиркам (по 100 мкл).
В пробирки добавляли по 5 мкл меченных флуорохромом
моноклональных антител. Инкубировали при +30° С 15-20 мин в темноте.
В пробирки добавляли по 1 мл раствора CellWASH и
центрифугировали 5 мин при 1600 об/мин. Надосадочную жидкость сливали, в пробирки добавляли по 100 мкл раствора CellWASH (или CellFix).
Проводили анализ лимфоцитов на проточном цитометре.
2.3 Определение уровней цитокинов методом иммуноферментного анализа
Концентрацию цитокинов определяли с использованием тест-систем «BioSource» (Invitrogen, США). Принцип метода определения цитокинов -твердофазный иммуноферментный метод [14]. В этих наборах один тип антител иммобилизирован на внутренних поверхностях ячеек планшетов. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитопу определяемой молекулы находился в виде конъюгата с биотином. Индикаторным
компонентом являлся конъюгат пероксидазы хрена со стрептавидином,
имеющим высокое сродство к биотину.
Оборудование:
Многоканальный анализатор Dynex DSX (США), автоматическое промывающее устройство для планшет BioRad, автоматический шейкер-инкубатор (Elmi, Латвия), автоматические пипетки и дозаторы, лабораторная посуда.
Реагенты:
Иммуноферментная тест-система BioSource ELISA.
Выполнение анализа: